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目的建立套式逆转录聚合酶链反应(Nested RT-PCR)检测临床样本副流感3型病毒(HPIV3)基因的方法，并进一步对扩增产物进行序列分析，结合临床资料，分析兰州地区HPIV3的感染现状及特征。方法1．收集2005年7月～12月，2006年10月～2007年3月兰州地区的呼吸道感染患儿的300份鼻咽部分泌物(NPS)标本。其中男性162例，女性138例。年龄4天～14岁。2．根据HPIV3血凝素蛋白(HN)的基因保守区设计引物，用套式RT-PCR检测NPS里的HPIV3基因。3．对HPIV3在小儿ARI(acute respiratory tract infection)中所占的比例、性别、年龄、季节分布及临床特点进行分析。4．随机选取11份HPIV3阳性序列，与Genebank上的已知序列进行比对，绘制遗传进化树，从基因进化角度对兰州地区HPIV3的进化特征进行初步探讨。结果1．300例标本用套式RT-PCR检测出HPIV3阳性46例，占总检测标本的15.33％(46／300)。2．在HPIV3阳性46例中，男性26例，感染率为16.04％(26／162)，女性20例，，感染率为14.49％(20／138)，男性比女性略高。年龄小于3岁的有42例，占总检出率的91.30％(42／46)，其中1岁以下的有17例，占总检出率的36.96％(17／46)。急性上呼吸道感染(URI)患儿标本192例，其中HPIV3检测阳性标本32例，(阳性率为16.67％)，急性下呼吸道标本108例，其中HPIV3阳性14例(阳性率为12.96％)。3．在所收集标本月份中，每个月份均有HPIV3的检出，其中2005年11月，2007年1月，2月为高峰期。4．随机选取11份阳性标本送检测序，测得的核苷酸序列经过blast软件比较，与GeneBlank中的已知的HPIV3序列同源性在91.0％～99.6％之间。序列结果分析提示，随机选取的RT-PCR阳性的11例标本是HPIV3阳性。 5．基因进化树分析显示，11份阳性样本序列属同一进化枝，6份2006年，10月～2007年，3月的样本序列除145SEQ外属同一进化分枝。而5份2005年的样本序列除1630SEQ外，与日本分离株同属同一进化分枝。结论： 1．HPIV3在兰州地区呼吸道感染患儿中占较高的比例，是引起小儿呼吸道感染的重要呼吸道病原之一，其所致呼吸道感染以3岁以下婴幼儿多见，尤以1岁以下为多，但男女感染比例无显著性差异(x~2=0.3956 p＞0.05)，上下呼吸道感染率无显著差异(x~2=0.7303 P＞0.05)。 2．HPIV3在兰州地区2005年，7月～12月，2006年，10月～2007年，3月中每个月均有散发，但在冬春季形成流行高峰。 3．套式RT-PCR检测方法用于HPIV3的基因诊断具有特异性强，检出率高的优点。 4．通过基因进化树的分析显示，2005年样本序列与2006年样本序列有很近的亲缘关系，但分属两个进化分支，说明这两个时间段的HPIV3流行株在基因进化关系上存在差异，2005年样本序列与日本的HPIV3分离株同属同一进化分支，显示了HPIV3流行株可能存在地域相关性。