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目的:研究血红素诱导肺泡巨噬细胞血红素加氧酶-1合成及其抗炎作用的分子机制。
方法:通过在体支气管肺泡灌洗获取大鼠肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages,AMs)。经瑞氏-吉姆萨染色鉴定纯度和台盼蓝染色鉴定细胞活力后,将AMs分组。实验共分为七个组:对照组(Saline);脂多糖组(LPS);血红素组(Hemin);脂多糖+血红素组(LPS+Hemin);脂多糖+血红素+血红素加氧酶-1的活性抑制剂锌原卟啉(Zinc protoporphyrinⅨ)组(LPS+Hemin+Znpp);脂多糖+血红素+P-p38MAPK的阻断剂SB203580组(LPS+Hemin+SB)和SB组。各组细胞于刺激30min后,用Western blot法检测AMs中P-p38MAPK的表达水平;各组细胞于刺激24h后,用Western blot法检测AMs中HO-1的表达水平,同时测量细胞精氨酸酶活性、吞噬能力和培养上清中NO,IL-10含量。
结果:与LPS组相比,Hemin组P-p38MAPK,HO-1表达明显增多(P<0.05),NO分泌减少同时精氨酸酶活性明显增强(P<0.05),而吞噬能力无明显差异;与LPS组相比,LPS+Hemin组P-p38MAPK,HO-1表达明显增多(P<0.05),NO分泌减少而精氨酸酶活性和吞噬能力明显增强(P<0.05);与LPS+Hemin组相比,LPS+Hemin+SB组的P-p38MAPK,HO-1表达明显减少(P<0.05),同时NO分泌增多而精氨酸酶活性和吞噬能力明显减弱(P<0.05);与LPS+Hemin组相比,LPS+Hemin+Znpp组NO分泌增多而精氨酸酶活性和吞噬能力明显减弱(P<0.05);与其余组相比,LPS组IL-10分泌明显增多(P<0.05),而其余各组IL-10的分泌量无统计学差异。
结论: Hemin可通过提高AMs P-p38MAPK水平使HO-1表达增加;HO-1表达增加可以使AMs精氨酸酶活性和吞噬能力增强,NO含量减少。