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目的研究蒙药阿拉嘎斑布的有效成分斑蝥素对肝癌Hep G2细胞的形态、增殖、凋亡、细胞周期等生物学行为的影响,同时,检测斑蝥素对Hep G2细胞m RNA和micro RNA差异表达谱的影响,进一步了解斑蝥素对肝癌细胞作用的分子机制。方法应用倒置光显微镜观察不同浓度的斑蝥素对Hep G2细胞形态的影响;采用MTT法检测斑蝥素对Hep G2细胞增殖的影响,并计算IC50值;应用Caspase3/7检测法和流式细胞仪Annexin V-APC/PI双染法检测斑蝥素对Hep G2细胞凋亡诱导的作用;采用流式细胞仪PI单染法检测斑蝥素对Hep G2细胞周期分布的影响;在基于以上生物学行为相关实验的基础上,进一步通过全基因转录组测序技术检测斑蝥素对Hep G2细胞m RNA和micro RNA差异表达谱的影响。结果(1)2.5μmol/L斑蝥素作用Hep G2细胞48h后,可见细胞变圆、皱缩等形态改变,当浓度达到15μmol/L时,细胞变圆、皱缩等形态改变更加明显;(2)MTT法结果显示,随着斑蝥素浓度的增加,对Hep G2抑制率也在增加,呈现剂量依赖性,计算48h的IC50值为10.34μmol/L;(3)细胞凋亡检测结果显示,与对照组相比,10μmol/L的斑蝥素作用Hep G2细胞48h后的Caspase3/7荧光强度由7661.67±108.87增加至24310±305.50,差异有统计学意义(P<0.01);(4)与对照组相比,10μmol/L的斑蝥素作用Hep G2细胞48h后的早期和晚期凋亡以及坏死细胞的比例均增加,且差异具有统计学意义(P<0.05);(5)与对照组相比,10μmol/L的斑蝥素作用Hep G2细胞48h后的G0/G1期和S期细胞占比均下降,差异有统计学意义(P<0.05),而G2/M期细胞占比则上升,且差异显著(P<0.01);(6)以|log2(Fold Change)|>2且padj<0.05作为基因显著差异表达的筛选标准,共筛选出包括5701个显著差异表达的m RNA(5136个基因上调、565个基因下调)和89个显著差异表达的micro RNA(21个基因上调、68个基因下调),通过查阅文献并结合GO功能富集和KEGG通路富集分析,初步发现43个可能为斑蝥素作用于Hep G2细胞时的关键应答基因,包括18个m RNA和25个micro RNA。结论蒙药阿拉嘎斑布的有效成分斑蝥素可显著抑制肝癌Hep G2细胞的增殖,其机制可能与诱导细胞周期阻滞于G2/M期、诱导细胞凋亡有关。斑蝥素可能通过对Hep G2细胞m RNA和micro RNA差异表达谱的影响,进而影响该细胞的生物学行为。其中,某些差异表达的m RNA和micro RNA可能为探讨斑蝥素抑制肝癌分子机制提供部分实验线索和依据,或许可以成为肝癌早期诊断和治疗的靶点。