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用PK-15细胞培养的细小病毒病病毒(PPV)经差速离心和蔗糖密度梯度离心，纯化抗原免疫BALB／c小鼠。用由本实验室构建并保存的PPV—VP2基因的原核表达载体，经IPTG诱导融合表达出VP2基因蛋白，经SDS—PAGE检测是所要的目的蛋白，然后粗提纯的蛋白用Western-blotting检测有较好的免疫反应活性，将其作为间接ELISA的包被抗原建立间接ELISA，用来筛选融合后的杂交瘤细胞。取免疫BALB／c小鼠的脾细胞与NS。骨髓瘤细胞融合经间接ELISA筛选，3次有限稀释法克隆，获得了3株能稳定分泌抗猪细小病毒核衣壳蛋白VP2的单克隆抗体杂交瘤细胞株，命名为PPV—VP2—CC1、PPV—VP2—BD2、PPV—VP2—CD12。其中只鉴定CC1株杂交瘤，经鉴定该株杂交瘤为IgG1亚类，杂交瘤细胞的平均染色体数目为99条，杂交瘤细胞培养上清及小鼠腹水单克隆抗体的ELISA效价分别为2~5和2~11。CC1株单克隆抗体与猪繁殖-呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒均不发生交叉反应，显示良好的特异性。连续培养21代，CC1杂交瘤细胞株能稳定分泌抗体。腹水经辛酸硫酸铵纯化后，蛋白含量为2.151mg／mL。此种单克隆抗体的获得为PPV的研究、快速诊断方法的建立奠定了基础。 利用CC1杂交瘤细胞株的小鼠腹水单克隆抗体和兔抗PPV IgG建立了检测PPV的多抗—待检病料—单抗—二抗的双夹心ELISA方法。经测定，兔抗PPV高免血清单克隆抗体的最适包被浓度为4.04μg／mL(1：1600倍稀释)，McAb的最适工作浓度为6.45μg／mL(1：400)，其检测灵敏度为215.5ng／mL。该检测方法与常见的猪的几种传染病病原无交叉反应，与病毒分离对比检查试验有较高的符合率。整个操作过程仅需4.5h(不包括包被)。双夹心ELISA的建立为生产上提供了一种更简单、快速、灵敏、应用广泛的PPV检测方法。