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目的:本研究利用流式细胞技术检测CD133、CD44、EpCAM及CD90在SK-Hep-1人肝癌细胞系及Huh-7人肝癌细胞系中的单个表面标记表达及多个表面标记共同表达,筛选出多种标记共同表达阳性比例较高的阳性细胞亚群及相对应的多标记共表达阴性细胞亚群,在体外实验中研究两种细胞亚群的体外更新能力、增殖能力、分化能力及耐药能力。方法:1.在体外用DMEM培养SK-Hep-1人肝癌细胞及Huh-7人肝癌细胞。采用流式细胞仪检测SK-Hep-1人肝癌细胞及Huh-7人肝癌细胞中的CD133、CD44、EpCAM及CD90的单个标记表达及多个标记共表达,选取Huh-7人肝癌细胞进行体外实验研究。2.CD133+CD44+EpCAM+Huh-7人肝癌细胞亚群及CD133-CD44-EpCAM-Huh-7人肝癌细胞亚群在DMEM/F12悬浮培养基中培养进行成球能力的观察。3.用平板克隆形成实验比较CD133+CD44+EpCAM+Huh-7人肝癌细胞亚群与CD133-CD44-EpCAM-Huh-7人肝癌细胞亚群的增殖能力。4.用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测CD133+CD44+EpCAM+Huh-7人肝癌细胞亚群及CD133-CD44-EpCAM-Huh-7人肝癌细胞亚群的耐药能力。5.用蛋白质印迹法(WB)检测CD133+CD44+EpCAM+Huh-7人肝癌细胞亚群及CD133-CD44-EpCAM-Huh-7人肝癌细胞亚群中的CD133、CD44及EpCAM蛋白的表达。6.用实时荧光定量聚合酶链反应(qr-PCR)检测CD133+CD44+EpCAM+Huh-7人肝癌细胞亚群及CD133-CD44-EpCAM-Huh-7人肝癌细胞亚群中干性相关基因Nanog及Sox2的表达。结果:1.在Huh-7人肝癌细胞系及SK-Hep-1人肝癌细胞系中,CD133、CD44、EpCAM和CD90的阳性表达率分别为48.52%、31.99%、43.93%和0.37%及0.21%、36.19%、10.08%和84.72%;CD133+CD44+EpCAM+的共表达率分别约为11.88%及0.97%。2.CD133+CD44+EpCAM+Huh-7人肝癌细胞亚群比CD133-CD44-EpCAM-Huh-7人肝癌细胞亚群在体外具有更强的自我更新能力。3.CD133+CD44+EpCAM+Huh-7人肝癌细胞亚群比CD133-CD44-EpCAM-Huh-7人肝癌细胞亚群在体外具有更强的增殖能力。4.CD133+CD44+EpCAM+Huh-7人肝癌细胞亚群比CD133-CD44-EpCAM-Huh-7人肝癌细胞亚群在体外具有更强耐药能力。5.CD133+CD44+EpCAM+Huh-7人肝癌细胞亚群与CD133-CD44-EpCAM-Huh-7人肝癌细胞亚群中CD133、CD44、EpCAM蛋白的表达量差异明显。6.CD133+CD44+EpCAM+Huh-7人肝癌细胞亚群中干性相关基因Nanog、Sox2的表达量比CD133-CD44-EpCAM-Huh-7人肝癌细胞亚群中的表达量高。结论:经本研究发现,CD133+CD44+EpCAM+Huh-7人肝癌细胞亚群在体外具有较高的增殖能力、自我更新能力、分化能力及耐药能力等干细胞特性。CD133+CD44+EpCAM+Huh-7人肝癌细胞亚群可能代表了肝癌干细胞的一种亚群,CD133+CD44+EpCAM+标记可能是分选肝癌干细胞更特异和更可靠的一种标记物。但尚需体内实验进一步证实其干性生物学特征。