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目的:催乳素释放肽(prolactin releasing peptide,PrRP)是1998年发现的一个含有31个氨基酸的神经肽,能特异性地与孤儿受体家族中的GPR10结合,被认为是GPR10的内源性配基。PrRP除能促进催乳素(prolactin,PRL)释放外,在对中枢心血管功能、应激、摄食及睡眠的调节中也具有重要作用。PrRP的形态学分布和功能研究表明,PrRP与生殖内分泌关系密切。 在女性生殖内分泌系统中,存在着两项重要的功能轴,一项是下丘脑—垂体—卵巢轴(hypothalamus-pituitary-ovary axis,HPOA),另一项是下丘脑—垂体催乳素轴。在女性生殖内分泌系统中,HPOA对生殖活动具有重要的调节作用。研究表明,GnRH是HPOA行使功能的始动因素和核心,又是调控生殖内分泌体系的最终共同通路(Final common pathway)。这两条轴关系密切,主要表现在以下几个方面:PrRP能促进LH、FSH的释放,PrRP的基因表达又受性激素水平的调节,而雌激素水平也会影响PRL的合成和分泌。PrRP对FSH和LH的作用,究竟是通过直接调节,还是通过生殖调控体系的最终共同通路GnRH间接调节的?PrRP与GnRH的关系又是如何?目前国内外尚未见报道,也是本文的主要研究目的之一。 围绝经期综合征是女性生殖内分泌系统的一种常见疾病,是由于卵巢功能低下导致HPOA功能异常引起的。临床上采用针刺治疗这一疾病,已取得了良好的疗效。本实验室以往的研究也表明,电针(electroacupuncture,EA)对去卵巢大鼠HPOA功能异常具有一定的调整作用。PrRP是否参与针刺对HPOA的调整作用,国内外至今未见文献报道,这也是本文的第二个研究目的。 PRL和E2可分别通过作用于脑内的PRL受体(PRL-R)和雌激素受体(ER-α,ER-β)影响PrRP、GnRH的合成和分泌及脑内其他神经递质和调质的分泌。但在针刺调整HPOA的过程中,针刺对PRL、E2、及PRL-R和ER-α、ER-β有何影响,目前研究较少。因此,本文的第三个研究目的是探讨电针对E2、PRL及其受体的影响。 方法:本文选用雌性SD大鼠,一半大鼠在乙醚麻醉下作双侧卵巢切除,术后4周,将去卵巢大鼠再随机分为OVX组和OVX+电针处理(OVX+EA)组。另一半正常大鼠分为正常组(州T)和正常+电针组(INT+EA)。电针穴位为“关元’夕、“中极”、双侧“子宫”和单侧“三阴交”,每天电针1次,每次30分钟,连续3天。 采用脑核团推挽灌流技术测定各组动物内侧视前区GnRH释放变化;用免疫组织化学技术,观察去卵巢术及电针对大鼠脑内PrRP和GnRH阳性细胞数目的变化;通过原位杂交结合免疫组织化学的方法,检测下丘脑GnRH阳性神经元(纤维)与PrRP受体mRNA是否共存;采用点杂交和RT一PCR技术,观察去卵巢术和电针对PrRP及其受体mRNA和GnRH及其受体mRNA的影响,以及电针对脑内PRL受体mRNA、ER一a和ER一p mRNA的影响;用放射免疫分析技术测定电针对去卵巢大鼠外周血EZ和PRL水平的影响。 结果:OVx组延髓PrRP mRNA及PrRP阳性细胞数显著低于INT组,OVX组延髓、下丘脑和垂体的PrRP受体mRNA的表达显著高于INT组;OVX组与INT组相比,大鼠下丘脑GnRH mRNA的表达升高,下丘脑内侧视前区GnRH释放增多,但下丘脑GnRH阳性细胞数降低,垂体GnRH受.体mRNA的表达减少。 免疫组织化学结合原位杂交的结果表,明,下丘脑GnRH一ir与P:RP受体mRNA共存。PrRP mRNA与 GnRH mRNA的相关分析表明,二者之间存在着负性相关关系。 OVX+EA组与OVX组相t匕,大鼠延髓P:RP mRNA及PrRP阳性细胞数显著升高,分布在延髓、下丘脑和垂体的PrRP受体mRNA的表达显著降低;下丘脑GnRH mRNA的表达降低,内侧视前区GnRH释放减少,但下丘脑GnRH阳性细胞计数却增加。 OVX+EA组外周血中EZ和PRL水平显著升高;OVX+EA组下丘脑ER一a mRNA表达显著增加,而ER一p mRNA表达却显著减少;OVX十EA组大鼠下丘脑PRL受体mRNA的表达显著升高。 结论:1 PrRP受体mRNA可能与GnRH一ir共存。脑内PrRP mRNA与GnRH mRNA之间存在 负性相关关系。2脑内PrRP系统可能参与生殖内分泌的调节。3电针对去卵巢大鼠脑内Pr即系统具有一定的调整作用。PrRP系统可能参与电 针对HPOA的调整过程。