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多发性骨髓瘤是最常见的血液系统恶性肿瘤,发病率超过急性淋巴细胞白血病。由于肿瘤细胞的高突变性、耐药性,以及现有治疗手段的缺陷,导致患者在接受传统治疗方式后,依旧面临难以治愈和复发的风险。近年来,嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞免疫疗法在临床研究中表现出巨大的潜力和优势,给多发性骨髓瘤患者带来了更多的希望。然而,由于现有的CAR-T疗法大多为自体型CAR-T,来自于患者本身的T细胞通常存在数量和质量上的不足,难以充分满足临床大规模治疗的需要,而基于基因编辑技术构建的通用型CAR-T细胞来源于健康供体,不依赖于患者的淋巴细胞,具有制备成本低,随时可用的优势,此外,使用健康人体内活性好、杀伤功能强的T细胞还能进一步提高CAR-T细胞杀伤肿瘤的活性,可以为患者提供更快、更高效的通用型CAR-T细胞产品。因此,本研究拟利用实验室前期筛选获得的分别靶向BCMA和CD38分子的全人scFv片段,构建治疗多发性骨髓瘤的自体型CAR-T细胞,并在此基础上构建靶向BCMA的通用型CAR-T细胞。随后,通过全基因合成构建了含有scFv基因序列的重组质粒,并且利用EcoR I和Xbal I双酶切及测序后鉴定显示插入的基因条带大小和序列正确,表明CAR载体构建成功。为构建CAR-T细胞,将含有CAR基因的各质粒与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,获得滴度大于2×10~5 TU/mL的病毒原液。病毒原液浓缩后用于感染健康捐献者的T细胞,感染后T细胞经流式检测,慢病毒感染效率达55%以上,可用于后期的杀伤实验。将CAR-T细胞与靶细胞共培养后,通过比较体外杀伤结果,TNF-α、IFN-γ的释放以及小鼠体内抗肿瘤效应,本研究筛选获得两条最佳CAR序列,分别为anti-BCMA-2077-CAR和anti-CD38-2430-CAR,为通用型CAR-T的构建奠定了坚实的基础。为进一步构建可用于异体移植的通用型CAR-T细胞,本研究利用基因编辑技术,敲除了anti-2077-CAR-T细胞中的TRAC和B2M,成功构建靶向BCMA的通用型CAR-T细胞,并在体内、外实验中评价其抗肿瘤的效果。结果显示:anti-2077-UCAR-T细胞与蓝鸟自体型的CAR-T细胞相比,同样具有良好的抑制肿瘤生长和杀伤肿瘤的效果,表明经过基因编辑技术改造后,CAR-T细胞仍能维持强大的肿瘤细胞杀伤能力,为临床中通用型CAR-T治疗多发性骨髓瘤提供了新思路。