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目的:胃癌是世界上也是我国最常见的恶性肿瘤之一,尽管在一些国家和地区胃癌发病率和死亡率有所降低,但到目前为止,胃癌的发病率和死亡率居全球肿瘤发病率和死亡率的第二位。因胃癌具有起病隐袭、早诊率低、手术切除率低、长期生存率低的特点,临床疗效不够满意。晚期胃癌患者已失去手术或放疗等局部治疗机会,治疗以全身化疗为主,但至今还没有公认的标准化疗方案。分子靶向药成为治疗肿瘤新的发展方向,分子靶向药重组人血管内皮抑素(恩度,YH-16)联合NP(长春瑞宾+顺铂)化疗方案已广泛应用于非小细胞肺癌,获得可喜成效并且明显改善晚期患者生存质量。目前YH-16联合化疗治疗肺外肿瘤正处于基础及临床研究之中。YH-16阻止肿瘤血管生成,抑制肿瘤生长,促进肿瘤细胞凋亡。亚叶酸钙(LV)和氟尿嘧啶(5-Fu)即LF方案为治疗胃癌公认的基础的化疗方案,5-Fu为抗嘧啶类抗代谢药,主要作用于S期细胞,LV为其增敏剂,LV与5-Fu合用杀灭肿瘤细胞,使与血管生成有关的生长因子分泌减少,进而减少肿瘤血管生成。YH-16和LF二者各自针对不同的细胞群攻击肿瘤使肿瘤减小,使YH-16+LF方案治疗胃癌具有合理性。本实验通过皮下移植肿瘤的方法建立C57 MFC小鼠前胃癌移植瘤模型,应用YH-16+LF方案治疗小鼠胃癌移植瘤,研究其对肿瘤的抑制和杀伤作用机制,为临床应用提供实验依据。方法:健康的C57小鼠,将MFC小鼠前胃癌细胞种植于小鼠皮下建成移植瘤模型40只,随机分成4组:每组10只,对照组:腹腔注射等量生理盐水;YH-16组:0.8mg/Kg,d1-14,腹腔注射;LF组:LV10mg/Kg,5-Fu 20mg/Kg,腹腔注射,d1-5,即LF方案;YH-16+LF组:LV 10mg/Kg,5-Fu 20mg/Kg,d1-5联合YH-16 0.8mg/Kg,d1-14,腹腔注射,即YH-16+LF方案。每天观察小鼠的一般情况,每3天测量肿瘤体积,绘制肿瘤体积生长曲线;第22天比较治疗组的体积抑制率及瘤重抑瘤率;进行石蜡切片HE染色,用免疫组织化学染色法检测肿瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)、微血管密度(MVD)、凋亡因子(Fas)表达。结果:1肿瘤体积变化对照组肿瘤体积逐渐增大, 22天时体积为1029.32±91.40mm3;治疗组包括YH-16组、LF组和YH-16+LF组,治疗组肿瘤体积呈上升-下降趋势,10天左右开始逐渐下降,22天时体积分别为259.01±75.44mm3、179.49±72.54 mm3、93.31±55.79mm3,体积抑制率分别为74.84%、82.56%、90.93%;与对照组相比,各治疗组体积抑制率明显升高且均有显著差异(P<0.01)。各治疗组间均有显著差异(P<0.05)。2瘤重抑瘤率治疗组YH-16、LF及YH-16+LF组的瘤重抑瘤率分别为43.04%,75.98%,87.53%,与对照组相比,各治疗组抑瘤率均明显升高且均有显著差异(P<0.01)。各治疗组间瘤重抑瘤率均有显著差异(P<0.01)。3两药相互作用YH-16+LF方案作用性质为协同作用。4小鼠行为学变化在用药的过程中,YH-16组小鼠活动敏捷,精神状态好,反应灵敏,正常进食水,未见明显不良反应。LF组及YH-16 +LF组进食水稍减少,未发现呕吐,活动敏捷,体重未见明显减轻。对照组小鼠随着移植瘤结节的逐渐长大,进食饮水减少,活动减少,消瘦,精神差,反应迟钝。5病理组织学变化瘤体直径较大,其中心可见大片细胞坏死,HE染色呈无结构的均一红染,其内可见残留少量尚未坏死的瘤细胞。体积大小不等,胞核异型多见。与对照组相比,各治疗组差异均有统计学意义(P<0.01);治疗组组间比较均有统计学差异(P<0.05)。6 VEGF蛋白表达对照组、YH-16、LF、YH-16+LF各组VEGF蛋白表达分别为68.50±14.25%、39.81±13.64%、52.13±14.96%、15.51±8.28%。与对照组比较,各治疗组VEGF蛋白表达均明显减低且均有显著差异(P<0.05),各治疗组间比较均有显著差异(P<0.05)。7 Fas蛋白表达对照组、YH-16、LF、YH-16+LF各组Fas蛋白表达分别为5.62±4.06%、12.01±4.47%、32.92±8.47%、48.61±7.01%。与对照组相比,各治疗组蛋白表达均明显升高且有显著差异(P<0.05),各治疗组间比较均有显著差异(P<0.01)。8 MVD计数对照组、YH-16、LF、YH-16+LF各组MVD计数分别为9.51±1.24、2.54±0.86、4.15±1.08、1.28±0.68。与对照组相比,各治疗组MVD计数均明显减少且均有显著差异(P<0.01)。各治疗组间比较均有显著差异(P<0.01)。结论:1采用皮下移植肿瘤的方法建立C57小鼠MFC胃癌移植瘤模型,操作上具有良好的可控性和对比性,移植成功率较高,成瘤时间短,肿瘤无自然消退现象。2 YH-16与LF联合治疗小鼠胃癌移植瘤具有合理性,并且具有协同作用。3 YH-16+LF方案对小鼠胃癌移植瘤具有明显的抑制和杀伤作用,近期疗效显著,联合用药未增加化疗药的毒副作用。4 YH-16通过下调VEGF,抑制形成血管的内皮细胞迁移,抑制肿瘤新生血管的生成,降低MVD,阻断肿瘤细胞的营养供给,联合LF的杀伤肿瘤细胞作用,共同上调Fas,促进肿瘤细胞凋亡,YH-16与LF二者各自针对不同的细胞群攻击肿瘤使肿瘤缩小。