前言：喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一，发病率占第二位，近年来有逐渐升高的趋势，严重影响着人们的健康和生命。治疗上，采取手术、放疗、化疗及生物治疗的个体化综合治疗方式。对于大多数晚期的喉癌患者，常需进行辅助性放疗，许多患者在放疗后会出现如咽瘘，吞咽困难等放疗副反应，甚至会出现放疗局控失败。喉癌是一种对放射中度敏感的肿瘤，如何提高其放射敏感性，使之既能增强局控率，又能降低对正常组织的损伤，减少副反应的发生，提高患者的生存质量，是一个很有研究价值的问题。研究表明肿瘤内存在缺氧细胞，喉癌细胞中也含有较高比例的乏氧细胞，这些细胞具有放射抵抗性，需要比常氧细胞更高的放射剂量方能被杀灭，然而受周围正常组织放射耐受性的限制，不能给予更高的照射剂量，因此这些乏氧的肿瘤细胞成为影响放疗效果的主要原因之一。 放射增敏剂是指能提高射线对细胞，尤其是肿瘤组织中乏氧细胞的杀伤力，而对受照射的正常细胞影响不大的一些化学物质(化学合成药物、中草药及其有效成分、生物制品等)。以硝基咪唑类化合物为代表的亲电子性化合物，能选择性地作用于肿瘤内的乏氧细胞，而对有氧细胞无活性，近年来被广泛研究。甘氨双唑钠是我国自主研发的国家一类创新药物，属于硝基咪唑类化合物，对实体肿瘤乏氧细胞有明显的放射增敏作用。有临床试验表明注射用甘氨双唑钠对鼻咽癌、食管癌和肺癌的放射治疗有肯定的放射增敏作用。但目前尚未有专门针对喉 本研究用甘氨双唑钠作用于离体乏氧的喉癌细胞，观察其对离体乏氧细胞的放射增敏作用，并探讨其增敏机制，为临床研究应用提供进一步的理论依据和借鉴。 研究目的： 1.研究甘氨双唑钠对离体乏氧的喉癌细胞Hep—2的放射增敏作用 2.探讨甘氨双唑钠对离体乏氧Hep—2细胞的放射增敏作用的机制 材料和方法： 喉癌细胞株Hep—2购自中南大学湘雅中心实验室，放射增敏剂甘氨双唑钠(商品名希美纳)由山东绿叶制药有限公司生产。1.将乏氧细胞作为实验组，常氧细胞作为对照组，在不同照射剂量下，以集落形成试验计算集落数，拟合存活曲线，得到两组的D0值及氧增比(OER)，建立离体乏氧细胞模型。2.在离体乏氧细胞模型建立成功基础上，设立含不同浓度(0.1mmol/L，0.5mmol/L，1.0mmol/L)甘氨双唑钠的乏氧细胞实验组，及单纯乏氧的对照组，然后经不同照射剂量照射(OGy，2Gy，4Gy，8Gy，12Gy，16Gy)，利用MTT法测量OD值，初步检测甘氨双唑钠的乏氧细胞放射增敏作用，再通过集落形成试验进一步证实其对乏氧Hep—2细胞的放射增敏作用。3.流式细胞仪分析不同浓度甘氨双唑钠作用下乏氧Hep—2细胞放射后的细胞周期变化，探讨可能的放射增敏机制。 实验数据以-x±s表示，每组实验均重复3次，计量资料采用SPSS13.0软件包行单因素方差分析、t检验及趋势卡方检验，所有检验均以p<0.05视为有统计学差异。应用多靶单击模型SF=1-(1-e—D/Do)n拟合存活曲线，并计算Do，Dq，放射增敏比以SER表示。 结果： 1.喉癌细胞Hep—2乏氧模型建立成功，常氧及乏氧组细胞经不同照射剂量照射所得存活曲线的D0值分别是：常氧状态D0为0.71，乏氧状态D0为1.88，氧增比OER为2.63。 2.在甘氨双唑钠浓度为0mmol/L，0.1mmol/L，0.5mmol/L，1.0mmol/L时，离体乏氧Hep—2细胞经不同照射剂量作用后，测量OD值，发现OD值在加入增敏剂组有减小，且程度随增敏剂浓度增加而增大。经统计学分析，各组间有统计学差异(p<0.05)。初步判断甘氨双唑钠对乏氧Hep—2细胞有放射增敏作用。 3.在甘氨双唑钠浓度分别为0.1mmol/L，0.5mmol/L，1.0mmol/L时，乏氧Hep—2细胞经0Gy，2Gy，4Gy，8Gy，12Gy，16Gy照射后，根据克隆(集落)形成实验结果，应用多靶单击模型SF=1-(1-e—D/Do)n拟合存活曲线，Do值分别为1.13，1.02，0.84，Dq值为2.60，2.30，1.54，放射增敏比SER分别为1.23，1.54，1.98。克隆(集落)形成实验进一步证明甘氨双唑钠对乏氧喉癌细胞Hep—2具有显著的放射增敏作用，随浓度增加，放射增敏作用增强。 4.乏氧照射后，随甘氨双唑钠浓度增加，Hep—2细胞发生G2/M期阻滞，药物浓度越高，G2/M期细胞阻滞比例越高，呈上升趋势。统计学分析各组间有显著性差异(p<0.05)。 结论： 1.甘氨双唑钠对离体乏氧喉癌细胞具有明显的放射增敏作用，其增敏效果随药物浓度的增加而增强。 2.甘氨双唑钠对离体乏氧喉癌细胞放射增敏机制可能与减少对放射耐受的G0/G1期细胞比例，增高对放射敏感的G2/M期细胞比例有关。