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猪瘟(Classical swine fever,CSF)被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的疫病之一,在我国时有发生。猪瘟的发生对我国造成巨大的经济损失和深远的社会影响,对其预防和控制显得尤为重要。通过注射弱毒疫苗来预防猪瘟的发生,仍是一些国家猪瘟防治的主要手段。本试验对猪瘟病毒流行毒株FJ237 E0基因进行原核表达,初步建立了间接ELISA检测猪瘟血清E0抗体的方法,为进一步开发猪瘟抗体检测试剂盒奠定基础。根据流行毒株FJ237基因序列设计一对扩增猪瘟病毒E0基因的特异性引物,在引物的上下游分别加入XhoⅠ、EcoRⅠ酶切位点。通过RT-PCR获得长约687bp的目的片段。用相同的限制性内切酶直接酶切PCR产物和表达载体pET32a后构建重组质粒,转化宿主菌BL21(DE3),经酶切及PCR鉴定筛选出阳性克隆,测序证明目的基因以正确的阅读框插入了表达载体,用不同浓度的IPTG诱导表达E0蛋白,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,原核表达产物大小约为50 ku。经过对表达条件的优化,最后确定以37℃培养至OD600达0.6左右,加入IPTG至终浓度为0.1 mmol/L,再以30℃继续培养3h,这样的培养条件下表达量最大,经分析表达蛋白量约占菌体蛋白的25%。表达产物经Western blot分析,能被猪瘟阳性血清所识别。试验结果表明猪瘟E0基因在大肠杆菌中高效表达,且表达产物具有抗原性。目的蛋白经大量诱导表达,可溶性试验证明重组蛋白以可溶性形式存在于诱导菌液上清中,本实验用镍柱亲和层析法从上清中纯化了目的蛋白。纯化后的目的蛋白作为抗原包被聚乙烯微量反应板,初步建立检测CSFV抗体的间接ELISA诊断方法。结果表明,抗原的最适包被浓度为58μg /mL,血清最适稀释度为1:60;最适封闭液为10g/L BSA,封闭时间为37℃2h,最佳血清及二抗反应时间确定为37℃1h;底物显色液的最佳反应时间为15min。该方法的建立为猪瘟抗体监测提供了一种比较实用的血清学检测方法,同时也为进一步开发猪瘟抗体检测试剂盒奠定基础。