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迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)属肠杆菌科,是鱼类爱德华氏菌病的主要病原,给水产养殖业造成严重的经济损失。研究发现迟缓爱德华氏菌可以借助多种毒力相关因子以主动攻击或被动吞噬的方式入侵宿主细胞,但具体机制并未阐明。组蛋白样类核结构蛋白H-NS (Histone-like nucleoid structuring protein)是广泛分布于革兰氏阴性菌中的一类重要的全局转录调控因子,参与调控多种与毒力、代谢、环境应激反应等相关基因的表达。前期研究发现,H-NS对T6SS效应子EvpP具有调控作用。本课题基于比较蛋白组学分析筛选迟缓爱德华氏菌中受到H-NS调控的蛋白。在此基础上,重点研究H-NS调控迟缓爱德华氏菌T6SS效应子EvpB和EvpC的分子机制。首先,通过双向电泳技术比较野生株E. tarda EIB202与hns突变株在蛋白质组上的差异,鉴定出7个蛋白的表达受到H-NS的调控,分别与应激反应、代谢合成、膜结构及毒力有关,其中包括E. tarda的T6SS效应子EvpB和EvpC。通过qRT-PCR实验,验证了H-NS对EvpB和EvpC具有调控作用。其次,利用凝胶迁移率和足迹法实验考察H-NS1505与evpB和evpC的相互作用。在evpC上游高AT含量序列上共精确鉴定出8个H-NS1505结合位点,均为富含AT的序列。以上结果证明H-NS1505可直接结合到evpC上游多个高AT含量位点,通过形成类核蛋白丝结构来抑制evpB和evpC的转录表达。根据以上结果结合生物信息学的方法比较分析了这8个结合位点的序列特点,模拟出H-NS1505在E. tarda中的高亲和性序列5’-ATATAAAAT-3’。在此基础上,定点突变H-NS1505蛋白C端功能域中与DNA结合能力有关的氨基酸Q84和R86发现,突变这两个氨基酸会导致DNA结合能力下降甚至丧失,其中R86比Q84起着更为重要的作用。最后,考察了H-NS在E. tarda侵染蓝鳃太阳鱼细胞BF-2过程中的作用。黏附及内化实验结果表明H-NS对E. tarda黏附BF-2细胞的能力没有影响,但可影响E. tarda内化进入BF-2细胞的能力。本课题研究发现迟缓爱德华氏菌H-NS对T6SS效应子EvpB和EvpC具有调控作用,为进一步探索T6SS在E. tarda致病过程中的作用,完善E. tarda的毒力调控网络提供参考。