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目的 1. 从新生大鼠脑皮质分离培养神经干细胞;探讨一种新的有效离散体外培养神经干细胞球的方法。 2. 以Notch1, PS1, RBP-Jk 和 HES1作为研究对象,观察Notch通路信号分子在神经干细胞增殖分化中的表达变化。 3. 利用BMP-2和EGF两种细胞因子诱导神经干细胞分化,观测神经元的分化情况与神经干细胞及Notch信号通路表达的关系。方法 1. 用无血清培养和化学筛选法从新生大鼠脑皮质分离培养神经干细胞,用免疫荧光细胞技术鉴定神经干细胞;用滤网吸管结合短时间胰酶消化法离散神经球。2. 用RT-PCR、Western-blot法检测神经干细胞增殖分化中Notch通路信号分子表达变化。 3. 用RT-PCR、Western-blot、免疫荧光染色以及细胞计数的方法,观测神经元的分化情况与神经干细胞及Notch通路信号分子表达的关系。结果 1. 从新生大鼠脑皮质分离培养出表达Nestin抗原,具有自新能力和多分化潜能的神经干细胞;滤网吸管结合短时间胰酶消化法离散细胞球效果好,细胞存活率高(92.1%)。 2. RT-PCR结果显示,与干细胞相比,PS1和RBP-Jk表达量在分化2d明显降低,而在分化其它阶段无显著差异;Notch1和HES1表达量在神经干细胞和各分化阶段无明显差异。Western-blot结果显示PS1蛋白表达量在分化2d降低,其它阶段无明显差异。 <WP=5> 3. BMP-2组神经元所占比例明显高于Ctrl组和EGF组;EGF组神经元所占比例与Ctrl组相比无显著差别;与Ctrl组相比,BMP-2组和EGF组中Notch通路各基因表达量均无显著差异;PS1蛋白表达量在3组均无差异。结论 1. 从新生大鼠脑皮质分离培养出的细胞是具有自新能力和多向分化潜能的神经干细胞。滤网吸管结合短时间胰蛋白酶消化法是一种简便有效的离散体外培养神经干细胞球的方法。 2. 对体外培养的神经干细胞,Notch信号通路对于维持其增殖有重要的意义。 3. BMP-2对神经元的诱导分化作用强于EGF和自然分化;Notch信号通路的表达与神经元所占的比例多少无关。