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目的：慢性粒细胞白血病（chronic myelogenous leukemia，CML）是一种起源于造血干细胞的克隆性骨髓增殖性肿瘤，90%以上患者可检测到特征性的Ph染色体及其分子标志bcr/abl融合基因，Ph染色体是由位于9q34的abl原癌基因断裂并易位到22q11的断裂点集簇区bcr融合形成[1]。随着分子靶向治疗药物的广泛使用，bcr/abl融合基因的突变是导致治疗效果不佳的主要原因之一，且在疾病整个治疗与预后中起着重要的作用。研究发现，T315I基因突变是目前治疗CML耐药最难以克服的基因突变[2]，国外报道bcr/ablT315I突变在CML患者中的发生率约占15%左右[3]。鉴于目前国内关于bcr/ablT315I突变的研究鲜见报道。因此，本研究拟通过建立一种可行的酶切富集等位基因特异性PCR（酶切富集AS-PCR）检测技术检测T315I基因突变，为CML的分子靶向治疗及后续研究提供理论依据。方法：1.设计包括突变位点在内的两对PCR扩增引物，以健康人外周血淋巴细胞基因组DNA为模板，分别扩增出野生型abl基因第6号外显子片段和含有T315I突变的abl基因第6号外显子片段，并将其分别克隆至pSG5M-flag载体质粒中，构建含abl基因野生型及T315I突变型重组质粒标准品，并将所获重组质粒分别进行酶切及测序鉴定。2.酶切富集AS-PCR方法的建立。设计一对野生型和突变型abl基因序列的通用引物，分别以野生型和突变型重组质粒作为模板，经PCR扩增出目的片段，将扩增出的片段进行酶切。另设计一对仅针对T315I突变的特异性引物，以酶切产物为模板，进行AS-PCR检测，对反应体系及反应条件进行优化。分析该方法的灵敏度及特异性。结果：1.通过体外定点突变PCR法成功构建了野生型pSG5M-flag-abl(wild)和突变型pSG5M-flag-abl(T315I)的重组质粒标准品，且经酶切及测序鉴定与预期结果一致。2.成功运用了酶切富集AS-PCR法检测bcr/abl基因T315I点突变，该方法的灵敏度为0.18%，实验至此并未出现假阳性，该方法特异性好。结论：1.成功构建了野生型pSG5M-flag-abl(wild)和突变型pSG5M-flag-abl(T315I)重组质粒。2.建立了检测abl基因T315I突变的酶切富集AS-PCR方法，为临床检测该基因突变提供了一种灵敏度高、特异性好的方法。