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背景与研究目的:RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年来发现和发展起来的一门新兴的在转录水平上的基因阻断技术,是一种双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)分子在mRNA水平上关闭相应序列基因的表达或使其沉默的过程。目前,在某些病毒性疾病的治疗研究中已取得了一定的进展,在基因功能研究和基因治疗方面也已显示了巨大的应用前景。本研究旨在利用RNAi技术,通过体内及体外试验以探讨HPV16 E6小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)能否抑制宫颈癌细胞的生长及其作用机理,以期为宫颈癌的治疗提供一个新的特异性基因治疗手段,同时为RNAi应用于临床奠定理论基础。 方法:1.化学合成针对HPV16 E6的小干扰RNA(siRNA),借脂质体转染HPV16阳性的宫颈癌CaSki细胞,应用细胞计数的方法测定细胞生长曲线、活细胞率及细胞生长抑制率;采用吖啶橙染色法、透射电子显微镜和流式细胞术评价HPV16 E6 siRNA对宫颈癌CaSki细胞凋亡的诱导;流式细胞术检测HPV16 E6 siRNA转染后不同时间点细胞周期的变化。2.实时荧光定量RT-PCR和流式细胞术检测HPV16 E6 siRNA转染前后细胞中HPV16 E6、p53、p21 mRNA及E6、p53、p21、CDK2蛋白表达的变化。3.建立宫颈癌裸鼠移植瘤模型,将HPV16 E6 siRNA