论文部分内容阅读
目的:研究STAT6 反义寡核苷酸对哮喘小鼠脾淋巴细胞的影响作用。方法:实验细胞分组:正常鼠空白组(A 组)、正常鼠OVA 组(B 组)、哮喘空白组(C 组)、哮喘OVA 组(D 组)、哮喘治疗组(E 组)。正常设计并人工合成一段互补于小鼠STAT6 mRNA 翻译起始区271~290 的反义寡核苷酸片段,全链硫代修饰。用卵白蛋白和氢氧化铝复制哮喘模型,用淋巴细胞分离液分离脾淋巴细胞,进行体外培养并导入由阳离子脂质体转染剂Geneshuttle 携带的反义寡核苷酸,分别用RT-PCR 及免疫细胞化学观察脾淋巴细胞中STAT6 mRAN 的转录及STAT6 蛋白的表达水平,同时采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定脾细胞培养上清液中IL-4 的浓度。结果:D 组脾淋巴细胞中STAT6 mRNA 表达水平(2.26±0.52)明显高于A 组(1.16±0.48)、B 组(1.34±0.36) 、C 组(1.20±0.24)、E 组(1.17±0.43),均具有显著性差异(P 均<0.01),STAT6 ASODN 转染后,E 组脾淋巴细胞中STAT6 mRNA 表达水平显著低于D 组(P <0.01);免疫细胞化学结果显示导入反义寡核苷酸后,E 组STAT6 蛋白的表达明显减少;D 组脾淋巴细胞培养上清中IL-4 分泌水平(43.68±5.5 pg/ml)明显高于A 组(24.1±7.7 pg/ml)、B 组(29.63±8.9 pg/ml) 、C 组(28.49±6.3 pg/ml)、E组(26.47±8.4 pg/ml),均具有显著性差异(P 均<0.01),STAT6 ASODN 转染后, E 组培养上清中IL-4 分泌水平显著低于D 组(P<0.01)。结论:STAT6 ASODN 可特异性抑制哮喘鼠脾淋巴细胞中STAT6 mRNA 的转录及STAT6 蛋白的表达,并且能特异性抑制脾淋巴细胞中IL-4 的分泌,为反义技术治疗哮喘提供了依据。