泰山白首乌新品种生物学特性研究及其主要活性成分的含量测定

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泰山白首乌,又名白首乌、和尚乌、泰山何首乌,萝藦科鹅绒藤属戟叶牛皮消(Cynanchum bungei Decne.)的干燥块根,为中国特有补益中药。戟叶牛皮消,为多年生草本植物,广泛分布于我国山东、河北、甘肃一带,尤以山东泰安一带最为有名。作为我国特有滋补中药,市面上流通使用的泰山白首乌主要为药材饮片,有关泰山白首乌其他剂型的中药和保健品还有待开发。目前,泰山白首乌药源主要靠野生,由于生长周期长、产量低、过量采挖等因素,野生资源急剧减少,市场上大量流通使用的白首乌主要为同属异种的耳叶牛皮消的块根,二者化学成分有所差异,不能混淆。泰山白首乌药材的缺乏严重影响了其正常的临床用药需求,也严重影响泰山白首乌药材的开发利用。为开发泰山白首乌野生资源,解决人工种植关键技术和产量不足问题,对经过引种驯化后的泰山白首乌野生种进行系统选育,选育出一种优质高产的泰山白首乌品种,命名为“泰白1号”。本研究对泰白1号的生物学特性进行观察与研究,并结合泰白1号的药材性状和品质以及分子生物学方面的特征,以期为泰白1号的推广种植提供依据。研究结果如下:1.泰白1号的生物学特性目的:保证泰山白首乌新品种的品种特性、药材产量和质量以及为其实现现代化农业生产提供依据。方法:以通风良好的阔地作试验地,于4月上旬播种,出苗后及时疏苗、定苗,保证良好的田间管理,并通过观察比较泰山白首乌新品种与传统泰山白首乌的种子、植物学特征、生长发育规律以及产量等生物学特性。结果与结论:泰白1号的果实较传统泰山白首乌表现出个大、籽粒饱满的优势;泰白1号的种子较传统泰山首乌表现出粒大、饱满的优势;泰白1号植株生长整齐一致,叶色浓绿,根形好、毛根少、分枝能力强,单块根质量高,群体的整齐度高,综合性状明显优于传统泰山白首乌。2.不同品种泰山白首乌中主要活性成分的含量测定目的:测定不同品种泰山白首乌中白首乌二苯酮和白首乌乙素的含量,为评定泰山白首乌药材品质提供依据。方法:采用高效液相法,用C18柱,乙腈:水(30:70)作流动相,以0.8mL/min的流速,检测波长为280nm,进样量为10μL。泰山白首乌药材以甲醇超声提取两次,每次30min,离心所得上清液用0.22μm微孔滤膜过滤后备用。结果与结论:白首乌二苯酮和白首乌乙素在0.1~200μg/mL范围内线性关系均表现良好,相关系数分别为0.9992、0.9984;样品中白首乌二苯酮和白首乌乙素的含量在48小时内均稳定;重复进样得白首乌二苯酮的RSD为5.09%,白首乌乙素的RSD为2.96%;两种主要活性物质的加样回收率维持在94.79%~101.12%范围内,RSD不高于8%。该方法各项指标符合仪器分析要求。泰白1号药材中白首乌二苯酮和白首乌乙素的含量分别为0.755、0.017mg/g,其含量明显高于传统泰山白首乌。3.不同品种的泰山白首乌的ITS序列和psbA-trnH序列分析目的:明确泰白1号较其他栽培种和野生种的ITS序列和psbA-trnH序列的差异,并为中药DNA条形码以及泰山白首乌分子生药学特征的研究提供参考。方法:采用两对引物PsbAf-trnHr、ITS1-ITS4分别扩增不同样品DNA,扩增产物经纯化后克隆、测序,再利用MEGA5、DNAMAN等软件分析其ITS序列和psbA-trnH序列的变异特征。结果与结论:泰山白首乌不同品种的psbA-trnH序列均相同。泰山白首乌不同品种的ITS序列存在着一定的差异。来自于泰白1号种植基地的5个样品,较野生种以及传统泰山首乌形成独立的分支,表明来自于泰白1号种植基地的5个样品,较野生种发生了一定的变异,泰白1号品种具备遗传稳定性。所得的泰山白首乌的ITS序列和psbA-trnH序列丰富了基因库,为泰山白首乌以及泰白1号的分子鉴定奠定基础。
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