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第一部分：内源性Aggf1在大鼠SAH后的表达 目的： 探讨内源性的血管生长因子Aggf1在大鼠蛛网膜下腔出血(spontaneous subarachnoid hemorrhage,SAH)后的表达变化。 方法： 采用动脉穿刺法建立Sprague-Dawley（SD）大鼠SAH模型，并分别在SAH后3h、6h、12h、24h、72h断头收集出血侧大脑皮质，用免疫印迹蛋白法（Western blot）检测内源性Aggf1的表达；此外，在SAH后24 h断头取出出血侧大脑皮质，用免疫荧光（immunofluorescence）分别检测Aggf1在神经元、小胶质细胞、星形胶质细胞和血管内皮细胞的表达。 结果： 与对照组比较，Western blot结果显示内源性Aggf1在SAH后24h显著增加，并且在72h达到高峰；免疫荧光结果显示内源性Aggf1主要与血管内皮细胞、星形胶质细胞和小胶质细胞的标志物共染。 结论： SAH引起内源性Aggf1表达增加，此蛋白主要表达于血管内皮细胞、星形胶质细胞和小胶质细胞。 第二部分：外源性rh-Aggf1对SAH后脑损伤和炎症的作用 目的： 探讨外源性人重组蛋白Aggf1（rh-Aggf1）对SAH后神经功能、脑水含量、血脑屏障通透性、神经炎症的影响 方法： 建立SD大鼠SAH模型，模型建立后1h，经尾静脉注射rh-Aggf1;此外，在SAH模型建立前48h经侧脑室注射Aggf1 siRNA抑制内源性Aggf1的表达。在SAH后24 h采用改良Garcia评分方法和改良Beam Balance评分方法评估大鼠神经功能状况;在SAH后7d,14d,21d，采用步错实验(Foot Fault Test)评估大鼠运动和感觉功能；在SAH后21-25d，采用水迷宫实验（Morris Water Maze,MWM）评估大鼠长期的空间记忆功能；评估SAH模型出血评分；用干湿法检测双侧大脑半球脑水含量；用伊文思蓝（Evans Blue, EB)渗透量检测血脑屏障(Blood Brain Barrier,BBB)的通透性；用Immunofluorescence标记髓过氧化物酶（Myeloperoxidase,MPO）检测中性粒细胞的浸润；用Western blot检测TNF-α和IL-1β表达量。 结果： SAH导致改良Garcia和改良Beam Balance分数降低、脑水含量升高、Evans Blue渗透率增加，促进中性粒细胞浸润浸润和TNF-α、IL-1β表达。然而，给予rh-Aggf1治疗能显著地降低神经功能评分、脑水含量和Evans Blue渗透量，并能抑制中性粒细胞的浸润和TNF-α、IL-1β的表达。相反，抑制内源性Aggf1表达，加重了脑损伤和神经炎症。此外，在Foot Fault Test中，SAH后大鼠前肢步错次数增多，而rh-Aggf1治疗能明显改善大鼠运动协调能力；在Water Maze Test中，SAH后大鼠发现平台的时间和距离延长，而rh-Aggf1治疗后，大鼠的学习记忆功能显著改善。 结论： 外源性rh-Aggf1能改善大鼠SAH后神经功能障碍和长期运动协调、记忆功能缺损，降低脑水肿和血脑屏障的通透性，抑制中性粒细胞的浸润，下调炎症因子的释放，从而抑制炎症反应。然而，抑制内源性Aggf1加重了脑损伤和神经炎症。 第三部分 Aggf1通过PI3K/Akt/NF-κB信号通路发挥神经保护作用 目的： 探讨外源性rh-Aggf1对大鼠SAH后脑损伤的保护机制是否与PI3K/Akt/NF-κB信号通路有关。 方法： 参照第二部分。在大鼠SAH模型建立前30 min，经侧脑室注射PI3K特异性抑制剂LY293002；在SAH模型建立后1 h，经尾静脉注射 rh-Aggf1。在模型建立后24h，用改良Garcia评分方法和改良Beam Balance评分方法评估大鼠神经功能状况；用干湿法检测双侧大脑半球脑水含量；用Western blot检测Albumin、MPO、PI3K、p-Akt、Akt、VE-cadherin、Occludin、Claudin-5、p-NF-κB p65、NF-κB p65、TNF-α、和IL-1β的表达。 结果： LY294002预处理能显著逆转rh-Aggf1治疗在神经功能、脑水肿的作用；Western blot结果显示LY294002明显逆转rh-Aggf1治疗后Albumin渗透和MPO表达。与Vehicle组相比，外源性rh-Aggf1能明显增加PI3K、p-Akt、VE-cadherin、Occludin、Claudin-5的表达，降低p-NF-κB p65、NF-κB p65、TNF-α、和IL-1β的表达；而LY294002能明显抵消rh-Aggf1治疗后的下游分子改变。 结论： 在大鼠SAH后，外源性rh-Aggf1治疗能减轻BBB破坏、神经炎症的发生，从而改善神经功能缺损，其神经保护功能至少部分与PI3K/Akt/NF-κB信号通路的激活有关。