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为获得能够有效防除番茄灰霉病菌的优势生防菌株,本研究以植物内生菌G-1为研究对象,对其抗菌谱、分类学地位、抗菌物质的类型及其抗菌物质对番茄灰霉病的抑菌机制进行了初步研究,其主要研究成果如下:1.采用平板对峙法,以番茄灰霉病菌(Botrytis cirerea)、菜豆菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.lycopersic)、桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)等9种植物病原菌为指示菌,对内生菌G-1进行抗真菌谱活性测定,结果表明:G-1对番茄灰霉病菌、桃褐腐病菌抑菌效果最佳,抑菌率分别为83.14%和81.65%,对链格孢菌、镰刀菌等均有较好的抑菌活性。2.通过形态学观察、生理生化特性检测及16S rDNA与gyr A、gyr B等多基因联合分析,将G-1菌株的分类地位初步鉴定为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。3.G-1菌株代谢物抑菌活性测定结果表明,G-1菌株的代谢物对番茄灰霉病有较高的抑菌活性,抑菌率为85.87%。其代谢物具有较强的热稳定性,121℃处理30min,抑菌率为仍可达81.76%,G-1菌株代谢产物酸碱稳定性良好,具有较强的抗紫外辐射能力,紫外照射24h后抑菌率为85.68%。4.以番茄灰霉病菌为指示菌,通过“酸沉醇提”的方法对内生菌G-1抗菌物质进行粗提,并采用中压层析、高效液相色谱对其抗菌物质进行分离纯化,LC-MS进行分析结果表明:在29.08 min、30.07 min、31.73 min、40.05 min出现较强的吸收峰,经分析,G-1菌株分泌的抗菌物质主要为伊枯草菌素A及丰原素A 1465D等抗菌脂肽。5.借助扫描电镜对G-1菌株抑制番茄灰霉病菌的抑菌现象进行观测,结果表明:经G-1菌株抗菌肽处理后,番茄灰霉病菌菌菌丝生长异常,菌体畸形肿胀,内溶物大量外溢造成菌体消解现象。6.为探索抗菌肽抑制番茄灰霉病菌的分子基础,以抗菌肽分别处理番茄灰霉病菌3d、5 d,提取RNA,进行转录组测序与分析。转录组测序共得到了22.33 Gb Clean Data,总注释基因数中有12084条在NR数据库里匹配到了同源基因,占总注释基因的98.99%。通过GO、KEGG富集分析表明,G-1抗菌肽可能通过抑制番茄灰霉病菌细胞膜组分中SDH、HMGR的合成抑制菌丝及孢子的生长。RT-PCR验证发现,所筛选的8个相关候选基因中Bcin01g00020、Bcin01g00030、Bcin04g04450、Bcin03g05820、Bcin04g03050、Bcin04g05700在抗菌肽作用下低表达,Bcin01g03520和Bcin08g04970在抗菌肽作用下高表达,与转录组分析结果相吻合。