背景宫颈癌是最常见的妇科生殖道恶性肿瘤,是导致女性死亡的全球第四大恶性肿瘤,目前宫颈癌主流的治疗的原则为采用手术和放疗为主、化疗为辅的综合治疗原则,研究表明早期宫颈癌可达到完全治愈可能,但对于中晚期宫颈癌患者来说,80%会复发,复发的原因及后续治疗仍是妇科肿瘤面临的难题,亟需深入的研究及发掘。局部晚期宫颈癌（Locally advanced cervical cancer,LACC）的定义目前仍有争议,目前主要是是指局部肿瘤直径＞4cm的早期宫颈癌,即ⅠB2期、ⅡA2期及ⅡB期的巨块型宫颈癌。近年以来的研究表明新辅助化疗（Neoadjuvant chemotherapy）能够有效地缩减宫颈癌的局部病灶、降低其临床分期、提高化疗后的手术切除率、增强放疗敏感性,延长患者无进展生存时间及总生存时间。在宫颈恶性肿瘤方面,新辅助化疗目前主要应用于局部晚期宫颈癌（LACC）的治疗,虽然最新NCCN指南推荐,对于局部晚期宫颈癌首选同步放化疗,但在某些发展中国家及部分经济落后地区,新辅助化疗后手术仍是重要治疗方案之一。研究表明阴道微生物菌群发生紊乱不仅会导致一系列的阴道炎症,还可能是宫颈癌发生的影响因子。随着对菌群研究的进一步深入,部分菌群可通过调节信号传导通路抑制肿瘤的生长,也可以刺激免疫细胞的抗肿瘤作用。另外部分微生物菌群会通过促进肿瘤的浸润,抑制肿瘤内部免疫微环境以达到一个促进肿瘤发生发展的作用。总而言之,菌群在恶性肿瘤治疗中有值得深入研究的价值及应用。随着科学技术的发展,先进的测序方法如高通量测序的应用,可以检测到研究样本中的各种微生物组。同时,通过α多样性及β多样性的分析等方法分析菌群差异,并与临床资料及预后等结合研究。目前已经有许多研究者通过高通量测序在许多肿瘤组织内部检测到各种微生物组,并且在不同类型肿瘤组织中检测到其独特的肿瘤微生物组,显然肿瘤组织微环境中的微生物组具有差异,菌群改变会对肿瘤的发生和发展产生影响。最新研究表明宫颈癌组织中核梭杆菌的丰度显著高于正常及癌前病变患者,并且在宫颈癌中临床分期越高,其核梭杆菌丰度随之升高。这表明菌群与宫颈癌预后相关,但其具体机制仍不明确。我们知道,化疗药物的应用在杀死癌细胞的同时对正常细胞也会有损伤,细菌作为定植于人体的微生物群,势必也会受到化疗药物的影响,但是这种影响是正面的还是负面的,目前仍研究极少,并且产生这种微生态变化的结果是否反过来影响化疗的疗效也尚不明确。在局部晚期宫颈癌组织中菌群是否对新辅助化疗的疗效及预后的产生影响尚缺乏有效研究,这是本研究出发点。目的通过高通量测序的方法研究新辅助化疗后手术的局部晚期宫颈癌患者癌组织中菌群与预后的关系,检测其癌组织中菌群的丰度,分析菌群丰度变化及α和β多样性与临床病理资料及预后的关系,探究新辅助化疗后局部晚期宫颈癌组织中菌群多样性对其化疗结局影响及临床意义,为无法手术或无条件进行同步放化疗及根治性放疗的局部晚期宫颈癌患者治疗提供新的诊疗思路。方法首先,我们的研究纳入2010年至2015年之间就诊于广东省人民医院的诊断为Ib2期、IIa2期及IIb期的局部晚期宫颈癌患者,化疗前均经阴道镜或者直视下活检病理确诊为宫颈鳞状细胞癌或腺癌,并在术前行3疗程新辅助化疗后行宫颈癌根治术的患者共64名,所有病人均签署科研知情同意书。然后我们通过对标本库患者资料的筛选,调取入组的64例患者冻存的手术标本,进一步提取这64例宫颈癌手术标本冰冻组织总DNA进行研究,再通过PCR（Polymerase chain reaction）扩增微生物特征序列,通过对原始数据的处理,OTU聚类和统计,再进一步分析冰冻组织中菌群的多样性分析包括a多样性及β多样性等。使用的统计软件为SPSS statistics 25,使用独立样本非参数检验分析年龄、病灶大小及术后病理特点等分析新辅助化疗病人预后相关因素。通过t检验、卡方检验检测宫颈组织中菌群的表达量差异,将年龄、肿瘤浸润深度、阴道残端、宫旁、盆腔淋巴结转移及临床分期等临床病理因素纳入研究,采用Kaplan-Meier分析计算菌群丰度与宫颈癌新辅助化疗手术后的患者预后的关系,进一步得出宫颈癌组织中菌群多样性对新辅助化疗的疗效及预后的关系。结果1.局部晚期宫颈癌组织中的菌群丰度与新辅助化疗后患者复发及转移显著相关。术后无进展生存时间（PFS）与菌群的丰度有关系,P=0.032,具有统计学意义。术后总生存时间（OS）与菌群丰度无明显相关性,P=0.05,没有统计学差异。2.通过COX单因素及多因素分析提示新辅助化疗宫颈癌组织中盆腔淋巴结转移与宫旁阳性是复发及转移的独立危险因素。3.新辅助化疗宫颈癌组织中菌群丰度在肿瘤浸润及盆腔淋巴结转移之间有差异,P=0.045,具有统计学意义。4.通过α及β多样性分析等发现局部晚期宫颈癌患者新辅助化疗的疗效与菌群差异相关。5.对于18例菌群阳性的患者宫颈癌组织中微生物具有不同多样性,新辅助化疗的疗效与菌群丰度负相关。结论1.局部晚期新辅助化疗的宫颈癌患者组织中的菌群高丰度提示不良预后。2.新辅助化疗宫颈癌组织中菌群丰度对肿瘤浸润及盆腔淋巴结转移有影响。3.局部晚期宫颈癌组织菌群丰度与患者新辅助化疗的疗效呈负相关,是宫颈癌新辅助化疗患者复发及转移的预测指标。