【摘 要】
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目的:探讨浒苔多糖（EP）是否通过产生硫化氢（H2S）来调节非酒精性脂肪肝（NAFLD）大鼠的脂质代谢,在此基础上进一步探索其基于胱硫醚-γ-裂解酶/胱硫醚-β-合成酶/硫化氢（CSE/CBS/H2S）通路发挥降血脂作用,进而缓解NAFLD的可能机制。方法:1.建模及干预:选用50只成年、雌性SD大鼠为研究对象,将其随机分为5组:空白组（Control,Normal diet+H2O）、EP对照组
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目的:探讨浒苔多糖（EP）是否通过产生硫化氢（H2S）来调节非酒精性脂肪肝（NAFLD）大鼠的脂质代谢,在此基础上进一步探索其基于胱硫醚-γ-裂解酶/胱硫醚-β-合成酶/硫化氢（CSE/CBS/H2S）通路发挥降血脂作用,进而缓解NAFLD的可能机制。方法:1.建模及干预:选用50只成年、雌性SD大鼠为研究对象,将其随机分为5组:空白组（Control,Normal diet+H2O）、EP对照组（Normal diet+EP）、模型组（Model,High-fat diet+H2O）、EP干预组（High-fat diet+EP）、硫氢化钠组（High-fat diet+Na HS）,每组10只。空白组、EP对照组喂食正常饲料（Normal diet）,另外三组喂食高脂饲料（High-fat diet）。连续干预35d,5组大鼠其他常规条件一致。浒苔多糖干预剂量为200mg/kg·BW。硫氢化钠干预剂量为56μmol/kg·BW。2.观察肝脏及其组织结构:石蜡切片,苏木素和伊红（HE）染色。3.测定血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）、血清H2S和同型半胱氨酸（Hcy）水平。4.测定肝脏、大脑、心脏、肾脏、脾脏、肺组织中的CSE、CBS酶活性。5.测定肝脏、大脑、心脏、肾脏、脾脏组织中CSE、CBS蛋白水平:蛋白质印记法（Western-Blot）。6.测定肝脏、大脑组织CSE、CBS的m RNA表达水平:逆转录多聚酶链式反应（Real-time PCR）。结果:1.肝脏外观与肝脏系数:与空白组大鼠肝脏相比,模型组大鼠的肝脏颜色较淡,质地变软,体积较大,切边有油腻感,肝脏重量较重,肝脏系数明显较大（P<0.05）;与模型组相比,EP干预组、硫氢化钠组肝色较红润,肝脏重量较轻,肝脏系数明显较低（P<0.05）。2.HE染色后置于显微镜下观察,可以看到,与空白组相比,模型组大鼠的肝细胞脂肪变性数量多;与模型组相比,EP干预组、硫氢化钠组脂肪变数量较少,肝小叶结构及肝细胞形态较正常。3.血清血脂测定结果显示,模型组大鼠血清中TC、TG、和LDL-C均较空白组高（P<0.05）;而EP干预组、硫氢化钠组与模型组相比较,TC、TG、LDL-C较低（P<0.05）。4.血清H2S水平结果显示,在高脂饲料喂养的大鼠中,与模型组比较,EP干预组、硫氢化钠组血清H2S较高（P<0.05）。5.各脏器组织CSE、CBS酶活性:与模型组比较,EP干预组、硫氢化钠组肝脏、大脑、脾脏、心脏、肾脏的CSE、CBS酶活性较高（P<0.05）。各组大鼠肺组织CSE、CBS酶活性低于检出限（低于3.125μmol/L）。6.Western-Blot结果表明,与模型组相比,EP干预组、硫氢化钠组大鼠脑CBS和CSE蛋白表达较高（P<0.05）。高脂饲料喂养三组大鼠,在脾脏和肝脏中,与模型组相比,EP干预组CBS表达较高（P0.05）。同时,在心脏和肾脏中,我们观察到不同的作用,与模型组比较,EP干预组CSE表达较高（P0.05）。7.Real-time PCR结果显示,与模型组相比,EP干预组、硫氢化钠组大鼠大脑组织中CBS和CSEm RNA表达水平较高（P<0.05）。在肝脏组织中,与模型组相比,浒苔多糖显著增加CBSm RNA表达（P0.05）。结论:1.模型组大鼠肝脏系数增高,出现明显的肝细胞脂肪变性等病理组织学改变,并且血清中TC、TG、LDL-C水平升高,表明该实验中NAFLD大鼠模型成功建立。2.浒苔多糖通过CSE/CBS/H2S通路,增加某些器官组织CSE、CBS蛋白表达量,升高NAFLD大鼠血清H2S水平,使NAFLD大鼠的肝脏系数降低、血清TC、TG、LDL-C水平降低、肝细胞脂肪变等病理组织学状态得到改善。3.浒苔多糖的干预,只对NAFLD大鼠脂代谢有保护作用,并不会对正常大鼠的脂质代谢产生不良影响。
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