氯化锂是一种常见的抗抑郁、抗躁狂类药物，近年来其神经保护作用方面的研究越来越引起人们的重视。已有大量文献报道了该药物在体内和体外的神经保护作用，但其对视网膜神经节细胞保护作用方面的报道较少。 参与视网膜神经节细胞损伤的因素很多，但最终共同的通路是视网膜神经节细胞DNA损伤所导致的细胞凋亡。在神经元的DNA损伤中，DNA双链断裂(Double Strand Break，DBS)足DNA损伤的主要形式之一，如果该损伤不能得到及时修复，将给细胞带来严重的后果，导致细胞凋亡。 因此，从DNA损伤与修复的角度，对氯化锂保护视网膜神经细胞损伤的分子机制进行初步探讨和分析，对进一步研究氯化锂视神经保护机制有着重要的意义。 目的： 1.通过体内、体外实验观察并验证氯化锂对视网膜神经细胞的保护作用。 2.观察氯化锂对视网膜神经细胞DNA非同源末端连接修复频率的影响。 3.观察氯化锂对参与DNA非同源末端连接的Ligase IV、Ku、MreIl及转录因子CREB、CTCF mRNA表达的影响，并对各因子变化原因进行初步探讨。 方法： 1.原代培养SD乳鼠视网膜神经细胞，MAP2免疫荧光法鉴定神经细胞纯度。0.5mM，1.0mM，3.0mM氯化锂(对照组不加氯化锂)处理，12h后换至含0.5％FBS的培养基，进行缺血处理，36h后倒置显微镜下进行拍照，比较不同组问突起长度的差异。 2.原代培养视网膜神经细胞，缺血处理40h后提取细胞总DNA，电泳检测DNA的完整性。 3.原代培养SD乳鼠视网膜神经细胞，RT-PCR检测氯化锂对Mrell、Ku、LiagaseIV表达的影响。 4.Real time RT-PCR进一步检测氯化锂对原代培养视网膜神经细胞Ligase IV，转录因子CREB和CTCF表达的影响。 5.通过质粒转染，利用流式细胞仪检测GFP阳性细胞的比例，即视网膜神经细胞DNA非同源末端连接(NHEJ)的修复效率。 6.动物实验：实验组大鼠每日皮下注射1.5mEq/Kg氯化锂，对照组注射等量PBS，采用前房灌注法制造急性高眼压缺血再灌注损伤大鼠模型，术后1天、1周、2周取材，制作石蜡切片，进行常规HE染色、DAPI染色和原位凋亡检测，体内观察氯化锂对视网膜神经细胞的保护作用。 结果： 1.MAP2免疫荧光鉴定，所培养视网膜细胞中，神经细胞占80％。缺血处理36h后，对照组神经细胞突起较短(22.07±9.90μm)，加入不同浓度氯化锂进行处理的神经细胞突起较长，较对照组长度差异均有统计学意义；尤其加入1.0mM(48.71±15.93μm)和3.0mM(52.13±16.88μm)氯化锂组，细胞的突起较对照组明显增长、交织呈网状。 2.DNA电泳结果显示氯化锂促进神经细胞DNA的修复，染色体DNA更完整，发生的断裂较对照组明显减少。浓度1.0mM氯化锂为最佳。 3.RT-PCR检测表明，加入1.0mM氯化锂处理的神经细胞中，Ligase IV mRNA的表达，较对照组有明显增加，而Ku和MreIl表达量未见明显改变。 4.Real time RT-PCR检测再次显示，加入1.0mM氯化锂处理的神经细胞，LigaseIVmRNA的表达较对照组明显增加，另外，转录因子CREB和CTCF的表达也有明显增加。 5.缺血处理12h，转染断裂的pEGFP-N1，加入1.0mM氯化锂处理组的神经细胞表达GFP的比例明显高于对照组，说明氯化锂促进DNA的修复。 6.体内实验结果：对照组和实验组大鼠急性高眼压缺血处理后随着时间延长，均呈现出视网膜变薄的趋势，尤其术后1周、2周时比较明显；术后1周、2周时，注射氯化锂实验组的大鼠眼视网膜厚度均高于对照组眼，差异有统计学意义。DAPI染色，对照组眼中，凋亡的神经节细胞多于氯化锂注射组眼；原位凋亡检测，对照组视网膜凋亡细胞多于氯化锂注射组，且多位于节细胞层。 结论： 本研究从体内、体外的形态学证明：氯化锂对SD乳鼠视网膜的保护作用；从分子水平说明氯化锂可上调转录因子CTCF、CREB mRNA的表达；并发现氯化锂可上调DNA Ligase IV mRNA的表达，促进神经细胞DNA非同源末端结合(NHEJ)的修复效率，首次从DNA修复的途径阐明了氯化锂对视网膜神经细胞的保护作用。