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目的(1)对国产和越南产土茯苓的药材性状、切面显微及化学成分进行对比研究,为越南产土茯苓是否可供土茯苓药用提供依据;(2)确定土茯苓的特征成分,建立土茯苓HPLC特征指纹图谱及一测多评含量测定方法;(3)研究不同产地及生长年限土茯苓中新落新妇苷、落新妇苷、新异落新妇苷、异落新妇苷和黄杞苷的含量变化。方法(1)采用UPLC-MS法对国产及越南土茯苓醇提物中的成分进行对比分析;(2)采用HPLC-ELSD法对国产及越南土茯苓的糖类成分进行对比分析;(3)采用HPLC法建立土茯苓的高效液相特征指纹图谱,并进行方法学验证;(4)采用HPLC法建立土茯苓药材的一测多评含量测定方法,并进行方法学验证;(5)对国产及越南土茯苓进行性状及显微对比分析。结果(1)UPLC-MS法共检测土茯苓醇溶性化学成分19个,其中1个为土茯苓中未见报道的新成分,其余18个为已知成分,在此进行了鉴定和归属,分别为甲基丁二酸、棕榈酸、3,4-二羟基苯乙醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、3,5-二甲氧基-4-羟基-苯甲酸-0-β-D-葡萄糖苷、儿茶素、表儿茶素、5-O-咖啡酰莽草酸、5,7-二羟基-色原酮-3-O-α-L-鼠李糖苷、新落新妇苷、落新妇苷、新异落新妇苷、异落新妇苷、黄杞苷、异黄杞苷、2,4,6-三羟基苯乙酮-2,4-二-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、(+)-丁香树脂醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→6)β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮苷和柚皮素。(2)国产及越南产土茯苓的单糖和寡糖种类相同,均为葡萄糖和果糖,两者多糖水解产物均只含葡萄糖,多糖的组成无显著差异。经含量测定对比,国产土茯苓的多糖含量高于越南产土茯苓。(3)建立土茯苓的HPLC指纹图谱分析方法,共确定6个共有峰,指认6个特征成分,国产及越南产土茯苓以各自的标准指纹图谱对照,相似度均大于0.90,越南产土茯苓以国产土茯苓的标准指纹图谱评价,相似度均高于0.90。(4)建立土茯苓一测多评含量测定方法,同时测定土茯苓中新落新妇苷、落新妇苷、新异落新妇苷、异落新妇苷及黄杞苷的含量,经方法学验证,分别在进样量 0.0362-5.4341μg(r2=1.0000)、0.0362-5.4341μg(r2=1.0000)、0.0425-6.3681μg(r2=1.0000)、0.0372-5.5811μg(r2=1.0000)和 0.0068-1.0166μg(r2=1.0000)范围内有良好的线性关系,其回收率分别为93.20%、95.39%、93.80%、96.37%和99.05%,RSD分别为1.3%、2.2%、2.7%、2.3%和1.9%,重复性及稳定性均符合要求。(5)采用一测多评法测定了不同产地土茯苓中各成分的含量,结果国产土茯苓无明显的产地差异性,国产与越南产土茯苓含量差异明显,PCA及PLS-DA分析结果显示,落新妇苷的对差异性的贡献最大。(6)采用一测多评法测定了不同生长年限土茯苓中各成分的含量,结果各指标成分的变化趋势不同,落新妇苷随着生长年限的增加含量逐渐降低,新落新妇苷、新异落新妇苷和异落新妇苷随着生长年限的增加含量逐渐升高,不同植株间成分含量差异明显。(7)性状及显微对比结果表明,国产和越南产土茯苓除断面性状及个体大小外无显著差异。结论(1)越南产土茯苓个体普遍较国产土茯苓大,断面颜色较国产土茯苓深,多糖含量较国产土茯苓低,黄酮类成分较国产土茯苓高,除上述差异外,两者在药材的性状、显微、糖类成分和醇溶性成分上无明显差异,故认为越南产土茯苓可供药用。(2)根据LTQ-Orbitrap-MS一级质谱的精确分子量信息及二级质谱的碎片信息鉴定了土茯苓中的18种成分并检测出一种土茯苓中未见报道的新成分,建立的UPLC-MS法可用于土茯苓的成分分析及真伪鉴别。(3)建立的一测多评含量测定方法准确度较高,采用该方法测定样品55批,与外标法计算结果的平均偏差均小于1.0%,表明该方法可用于土茯苓中新落新妇苷、落新妇苷、新异落新妇苷、异落新妇苷和黄杞苷的含量测定和土茯苓的质量控制。(4)不同植株和不同生长年限土茯苓间5个指标成分含量差异明显,落新妇苷的含量变化趋势与其异构体不同,其含量随生长年限的延长而降低,而其异构体的含量随生长年限的延长而升高。