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为研究壳聚糖对产蛋后期蛋鸡生产性能、肠道微生物及免疫功能的影响,将450只产蛋率相近、健康的500日龄海兰褐蛋鸡随机分配到5个组,每组6个重复,每个重复15只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组饲喂在基础饲粮的基础上分别添加200、400、600和800 mg/kg壳聚糖的饲粮。试验共67天(预试期7d,正式试验期60 d)。试验期间,以重复为单位,每天定时收集鸡蛋,记录产蛋数、软破蛋数,并称量蛋重。每周测定各组每重复周采食日粮总量;于试验第60天,以重复为单位采集蛋样用于蛋品质测定,并于翅下静脉处采集血样用于血清生化指标、免疫指标和抗氧化指标的测定;于试验第60天,每重复随机选取1只鸡,不禁水空腹12h后,称重、致死后进行解剖,取除心脏、肝脏、脾脏、肌胃、腺胃及脂肪,称重记录并计算百分比;分别采集空肠、回肠、十二指肠中段1~2 cm组织样品,进行组织形态结构观察;采集盲肠食糜,分析盲肠微生物区系。试验结果:(1)生产性能:200和800 mg/kg添加组产蛋率显著高于对照组(P<0.05),200 mg/kg添加组破软蛋率显著低于对照组(P<0.05)。(2)蛋品质:各组蛋形指数、蛋黄重、蛋黄颜色、蛋壳重、蛋壳颜色与对照组相比及各试验组间均无显著差异(P>0.05)。各试验组的哈夫单位均有提高:600 mg/kg添加组显著高于对照组及400 mg/kg添加组(P<0.05),200和800mg/kg添加组与对照组相比有一定提高,但差异不显著(P>0.05)。(3)器官指数和腹脂率:各组间心脏指数、肝脏指数、脾脏指数、腺胃指数、肌胃指数以及腹脂率均无显著差异(P>0.05)。(4)血清生化指标:各组间ALB、A/G、AST、ALT、ALP、TG、GLU、HDL-C、LDL-C、Ca、IP等均无显著性差异(P>0.05)。200、400和600mg/kg添加组的TP和对照组相比显著增加(P<0.05),600 mg/kg添加组的TP显著高于800 mg/kg添加组(P<0.05)。(5)抗氧化指标:600 mg/kg添加组CAT活性相比对照组显著提高(P<0.05)。800 mg/kg添加组的GSH-Px活性相比对照组、200和400 mg/kg添加组极显著提高(P<0.01),600 mg/kg添加组的GSH-Px活性与对照组和200 mg/kg添加组相比极显著提高(P<0.01),800 mg/kg添加组的MDA含量与对照组相比显著降低(P<0.05),200、400和600 mg/kg添加组的T-SOD活性与对照组相比极显著提高(P<0.01),(6)免疫指标:各试验组的IgA、IgG、IgM水平差异均不显著(P>0.05)。(7)肠道组织形态:在空肠中,200和600 mg/kg添加组的绒毛高度与对照组相比显著增加(P<0.05),回肠形态中,400 mg/kg添加组的肠壁厚度与对照组、600和800 mg/kg添加组相比极显著提高(P<0.01),在十二指肠中与对照组相比,各试验组的隐窝深度均显著降低(P<0.05)、VH/CD均显著提高(P<0.05);600 mg/kg添加组的绒毛长度与对照组、200 mg/kg添加组相比极显著提高(P<0.01)。(8)盲肠微生物:使用16S rRNA Illumina MiSeq测序分析壳聚糖对产蛋后期海兰褐蛋鸡盲肠微生物的影响。通过物种Venn图分析可知,五个组共用物种数634,各组独有的物种数目的分别为17、8、14、6、14。由Alpha多样性分析,对照组和试验组的Sobs、Chao、Ace、Simpsoneven、Shannoneven、Shannon、Simpson、Coverage指数差异均不显著。通过群落组成分析,在门分类学水平上,各组主要优势菌群均为Bacteroidota(44%~61%)和Firmicutes(29%~48%)。在科分类学水平上,各组主要优势菌科为Bacteroidaceae(24%~33%)、Rikenellaceae(9.4%~14%)和Lachnospiraceae(7.8%~13%)。Bacteroides(23%~33%)和Rikenellaceae_RC9_gut_group(8.1%~11%)在属分类学水平上是主要优势菌属。通过组间显著性差异检验,门水平上试验组的厚壁菌门和放线菌门丰度显著高于对照组(Firmicutes,47.95 vs 29.29%,P=0.009;Actinobacteriota,2.891 vs0.714%,P=0.035);科水平上试验组的奇异菌科丰度显著高于对照组(Atopobiaceae,1.595 vs 0.290%,P=0.007);属水平上试验组的瘤胃球菌属、Olsenella和Subdoligranulum丰度显著高于对照组(Ruminococcus_torques_group,4.653 vs 2.064%,P=0.017;Olsenella,1.586 vs0.290%,P=0.008;Subdoligranulum,1.241 vs 0.290%,P=0.005)。通过构建系统发生进化树,发现对照组和试验组在门水平和属水平均存在明显差异。由此可见,在本试验条件下,在产蛋后期海兰褐蛋鸡日粮中添加壳聚糖对蛋鸡的各项生理指标均无不良影响,并能改善生产性能和肠道组织形态,调节肠道微生物菌群结构,增强机体抗氧化能力,提高蛋品质、肠道对营养物质吸收能力及机体蛋白质代谢水平。综合试验结果及养殖成本分析,在产蛋后期海兰褐蛋鸡日粮内添加壳聚糖最佳量为200 mg/kg。