【摘 要】
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目的:探讨自噬阻断剂氯喹对卵巢癌细胞的抑制作用及自噬阻断效果,进一步研究联合PARP抑制剂奥拉帕利对体内外卵巢癌铂不敏感细胞的抑制作用,为临床上耐药性卵巢癌的棘手治疗提供新思路以及实验基础。方法:1.CCK8法检测氯喹、奥拉帕利、顺铂对卵巢癌细胞株A2780S、A2780CP、OV2008、C13*的抑制效果,计算出药物IC50(Half maximal inhibitory concentrat
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目的:探讨自噬阻断剂氯喹对卵巢癌细胞的抑制作用及自噬阻断效果,进一步研究联合PARP抑制剂奥拉帕利对体内外卵巢癌铂不敏感细胞的抑制作用,为临床上耐药性卵巢癌的棘手治疗提供新思路以及实验基础。方法:1.CCK8法检测氯喹、奥拉帕利、顺铂对卵巢癌细胞株A2780S、A2780CP、OV2008、C13*的抑制效果,计算出药物IC50(Half maximal inhibitory concentration,半抑制浓度),并计算A2780CP、C13*细胞株的铂耐药指数(Resistance index,RI)。2.在卵巢癌铂不敏感细胞株A2780CP、C13*上进行正交实验研究氯喹与奥拉帕利的联用抗卵巢癌效应。3.流式细胞术检测氯喹、奥拉帕利、氯喹+奥拉帕利作用于A2780CP细胞株的凋亡率。4.WB法检测自噬蛋白Beclin 1、P62、LC3B的变化,了解不同浓度的氯喹以及奥拉帕利、奥拉帕利+氯喹对卵巢癌细胞株A2780CP自噬的影响。5.选用A2780CP细胞株建立裸鼠皮下移植瘤模型,设置对照组、氯喹组、奥拉帕利组、顺铂组、氯喹+奥拉帕利组进行给药,通过肿瘤体积进行药物联用效果的评价。6.HE染色观察各组裸鼠肿瘤组织HE染色形态学改变。7.透射电镜观察各组肿瘤组织的自噬结构,通过单位面积下的自噬结构、自噬小体/自噬溶酶体的比值进行自噬水平的比较。8.药物安全性检测:通过观察裸鼠活力、体重变化、肝肾切片HE染色观察结构改变。结果:1.氯喹具有一定的抗卵巢癌效应且在浓度为5μg/ml即可阻断卵巢癌细胞的自噬。2.对于铂不敏感卵巢癌细胞株A2780CP、C13*,氯喹与奥拉帕利的联合抗肿瘤效果均较单药好,一定浓度下具有轻微协同或者相加作用。3.体外实验中,自噬蛋白改变提示奥拉帕利诱导细胞自噬水平并引起自噬通量增加;体内实验中,肿瘤组织电镜切片可见奥拉帕利组自噬囊泡结构较对照组增加。4.流式细胞术实验提示氯喹与奥拉帕利的联合用药组凋亡情况主要是晚期凋亡,总凋亡率均高于单药组,具有统计学意义。5.联合用药抑制裸鼠皮下卵巢癌移植瘤实验中提示:对照组裸鼠肿瘤体积为2929±131mm~3,氯喹组肿瘤体积为2042±128mm~3,奥拉帕利组肿瘤体积为830±219mm~3,顺铂组肿瘤体积为520±185mm~3,氯喹+奥拉帕利组肿瘤体积为349±160mm~3。统计学检验结果显示:五组不同给药方式抑制卵巢癌的效果有差别,其中,氯喹+奥拉帕利组、顺铂组、奥拉帕利组的肿瘤体积小于对照组,差异有统计学意义(分别是P=0.000;P=0.002;P=0.040);氯喹+奥拉帕利组肿瘤体积小于奥拉帕利组,差异有统计学差异(P=0.037);氯喹+奥拉帕利组肿瘤体积小于氯喹组,差异有统计学差异(P=0.000);而氯喹+奥拉帕利肿瘤体积与顺铂组无统计学差异(P=0.272);氯喹组与对照组无统计学意义(P=0.646)。6.HE染色见各组裸鼠组织均为卵巢上皮性肿瘤,可见明显核分裂。7.透射电镜观察奥拉帕利组肿瘤切片可见细胞自噬囊泡增加,氯喹组及氯喹+奥拉帕利组自噬小体、自噬溶酶体堆积,自噬小体/自噬溶酶体比值较其他组别升高。8.各组裸鼠给药期间体重变化趋势不大,统计学分析各组裸鼠体重无统计学差异;肝肾结构与对照组相比未见明显破坏。结论:1.自噬阻断剂氯喹在卵巢癌细胞株A2780CP上具有自噬阻断效应,并且具有较好的抑制卵巢癌增殖效果。2.奥拉帕利可增加卵巢癌细胞株A2780CP细胞的自噬水平。3.氯喹与奥拉帕利联用抑制卵巢癌效果在体内外实验中可明显抑制铂不敏感卵巢癌细胞A2780CP的增殖,联用效果均优于单药。4.氯喹及奥拉帕利的联合用药在裸鼠身上具有一定的安全性。
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