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目的:观察吗啡诱导条件性位置偏爱(Conditioned Place Preference,CPP)大鼠在CPP获得与消退不同阶段脑奖赏神经环路中脑腹侧被盖区-伏核-前额叶皮质(VTA-NAc-PFC),以及吗啡耐受细胞中N-甲基-D-天冬氨酸受体亚基NR1的表达变化,从组织和细胞水平揭示NR1在吗啡诱导精神依赖中的作用;并在上述实验基础上,观察用左旋延胡索乙素(l-THP)治疗后,对大鼠吗啡CPP效应以及NAc核团中NR1表达变化的影响,为l-THP治疗阿片类依赖的应用补充新的实验依据。方法:1、大鼠吗啡CPP获得阶段VTA-NAc-PFC神经环路各脑区NR1的表达筛选出合格的SD大鼠,随机分成生理盐水(NS)对照组和吗啡CPP模型组,对各组大鼠采用剂量递增法(吗啡起始剂量从d1的10 mg/kg至d10的100 mg/kg)分别进行颈背部皮下注射生理盐水和吗啡,每次注射20 min后置黑、白箱中进行训练(白箱为吗啡伴药箱),连续注射10 d。在末次训练48 h后进行CPP测试,确认大鼠吗啡CPP模型建立成功后,立即将各组大鼠处死并取材(VTA、NAc、PFC),分别采用PCR和Western blot技术检测其NR1的表达变化。2、大鼠吗啡CPP消退阶段VTA-NAc-PFC神经环路各脑区NR1的表达变化利用上述方法建立大鼠吗啡CPP模型后,分别将NS对照组和吗啡CPP组大鼠自然放置28天进行CPP检测,确定大鼠吗啡CPP效应消失,立即将两组大鼠处死并取材(VTA、NAc、PFC),分别采用PCR和Western blot技术检测其NR1的表达变化。3、吗啡耐受神经元细胞中NR1的表达变化培养皮层神经元细胞,设置NS对照组和吗啡实验组,分别加入NS及10μmol/l吗啡,48 h后分别收集细胞,提取蛋白质,采用Western blot方法检测其细胞中NR1的表达。4、l-THP治疗对大鼠吗啡CPP效应和NAc脑区中NR1表达的影响利用上述方法在建立大鼠吗啡CPP模型的基础上,将大鼠分成6组:NS对照组、吗啡CPP组、NS治疗组、l-THP低、中、高剂量治疗组。在确认大鼠吗啡CPP模型建立成功后,对NS对照组和吗啡CPP组大鼠立即处死并取材;剩余4组大鼠,除NS治疗组灌胃用NS外,其他l-THP低、中、高剂量治疗组大鼠则分别给予l-THP 0.94mg/kg、1.88 mg/kg和3.76 mg/kg进行灌胃治疗,持续治疗6 d再次检测CPP后即刻处死并取NAc脑组织。采用Western blot技术检测其在NAc脑区中NR1的表达。结果:1、大鼠吗啡CPP获得阶段VTA-NAc-PFC神经环路各脑区NR1的表达在吗啡注射末次训练48 h后,经过CPP测试,NS对照组大鼠在白箱停留的时间在训练前后无明显差异(训练前393±81 s、训练后为416±58 s)。吗啡CPP组大鼠训练后与训练前比较,训练后在白箱中的停留时间明显延长(训练前408±93 s、训练后528±81 s)(P<0.01)。同时吗啡CPP组与NS对照组比较,CPP模型组大鼠训练后在白箱中停留时间明显延长(P<0.01)。吗啡CPP组与NS对照组比较,大鼠NAc中NR1 m RNA表达水平较NS对照组显著增加,具有统计学意义(P<0.05),而大鼠吗啡CPP组VTA和PFC的NR1 m RNA水平较NS对照组虽有增加但无统计学差异(P>0.05)。对于NR1的蛋白表达,大鼠吗啡CPP组NAc中NR1蛋白表达较NS对照组显著增加(P<0.01),而VTA和PFC脑区的NR1蛋白水平在两组之间比较同样增加,但同样无统计学意义(P>0.05)。2、大鼠CPP消退阶段VTA-NAc-PFC神经环路各脑区NR1的表达在大鼠吗啡CPP建立成功并自然消退28d进行CPP检测:生理盐水对照组大鼠在白箱中停留的时间为410±69 s,吗啡诱导的CPP组大鼠在白箱中停留的时间为396±117 s,两组大鼠白箱停留时间比较无统计学差异(P>0.05);两组大鼠VTA、NAc、PFC各脑区NR1 m RNA以及蛋白表达水平之间比较亦无显著性差异(P>0.05)。3、吗啡耐受细胞中NR1的表达变化在吗啡加入神经元细胞培养后48 h,与生理盐水对照组比较,吗啡实验组细胞中NR1的蛋白表达水平显著增加(P<0.01)。4、l-THP治疗对大鼠吗啡CPP效应及NAc脑区中NR1表达的影响在末次训练48 h后,NS对照组大鼠训练前后在白箱中的停留时间分别为383±62s和401±76 s;吗啡CPP组为407±83 s和528±40 s;NS治疗组为386±75 s和527±55 s,治疗6天后为524±79 s;l-THP低剂量治疗组训练前后分别为396±81 s和523±32 s,治疗6天后为519±47 s;l-THP中剂量治疗组训练前后分别为389±95 s和528±42 s,治疗6天后为386±76 s;l-THP高剂量治疗组训练前后分别为399±65 s和536±67 s,治疗6天后为386±88 s。与NS对照组比较,大鼠吗啡CPP模型组、NS治疗组、l-THP低、中、高剂量治疗5个组大鼠在白箱中停留时间明显增加(均P<0.01);经不同浓度的l-THP治疗6 d后,与NS治疗组比较,l-THP中、高剂量治疗组大鼠在白箱的停留时间减少(均P<0.01)。与NS治疗组比较,l-THP中、高剂量治疗组大鼠NAc中NR1蛋白含量明显降低(P<0.05)。结论:1.NR1 m RNA和蛋白在大鼠吗啡CPP获得阶段NAc脑区表达增加,而在吗啡CPP消退阶段均恢复到对照组水平,结合在吗啡处理神经元细胞中NR1蛋白表达的增多,提示NR1表达的改变在吗啡精神依赖形成中发挥有一定的作用,可能是吗啡精神依赖形成的机制之一;2.l-THP通过逆转NAc脑区中NR1蛋白的异常表达,可能是加速吗啡CPP效应消退的又一药理作用机制。