水稻纹枯病菌营养体亲和性分化研究

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水稻纹枯病是世界性的水稻病害之一,对水稻的为害日趋加剧,严重地制约着水稻的稳产、高产。种植抗病品种是防治植物病害经济有效的措施之一,而目前尚未有育成高抗水稻纹枯病的品种报道,其主要原因之一是水稻纹枯病菌具有强腐生性、宽寄主范围和复杂的遗传背景。为了解水稻纹枯病菌的遗传变异情况,本研究在调查田间水稻纹枯病菌营养体亲和性变化情况的基础上,以强致病力菌株cx-2为出发菌株,分析影响该菌株营养体亲和性分化的因子,利用AFLP分子标记分析了水稻纹枯病菌营养体亲和性分化的遗传特性,并对营养体亲和性分化菌株的不亲和原因进行初步分析。主要研究结果如下:1、水稻纹枯病菌在田间具有较高比例的营养体不亲和现象。2012-2014年间对早稻田水稻移栽50 d后的田间水稻纹枯病菌的营养体亲和性情况调查发现,2012、2013和2014年分离菌株间的不亲和比例分别为24.26%、39.22%、41.10%。2、水稻纹枯病菌的营养体亲和性分化与“稻-菌”互作和pH有关,但与水稻品种的抗性、测试的杀菌剂和温度无关。将菌株cx-2在30个不同水稻品种上进行5次连续的接种和再分离,从450株再分离菌株中鉴定出24株营养体亲和性分化的菌株,24个菌株分别来自于其中的15个水稻品种,每个品种接种的3株植株中只从一株植株上分离到营养体亲和性分化菌株;菌株cx-2连续接种在不同抗性水稻材料再分离后,鉴定出的营养体亲和性分化的菌株比例与水稻品种抗性没有对应关系;在PDA培养条件下,菌株cx-2在甲基硫菌灵、苯醚甲环唑、丙环唑等杀菌剂的EC50浓度下进行10次连续继代培养,无论是单一药剂还是两种药剂交替胁迫条件下均未分离到营养体亲和性分化菌株;菌株cx-2在不同pH的PDA平板上进行继代培养,在酸性和中性条件下未分离到营养体亲和性分化菌株,该菌株在碱性条件(pHH10,pH11)下容易发生营养体亲和性分化。菌株cx-2在5、10、15、20、25、30、35和40℃的供试温度条件下,经PDA平板连续继代培养10次的菌株中均未检测到营养体亲和性分化菌株。营养成分也可影响水稻纹枯病菌菌株cx-2营养体亲和性分化,在供试培养基中NA和DP培养基能诱导菌株cx-2营养体亲和性分化,其营养成分中的蛋白胨是引起水稻纹枯病菌营养体亲和性分化的主要因素。结合该菌在碱性条件下容易发生营养体亲和性分化的特性,制备的PA培养基在pHH10条件下能快速诱导水稻纹枯病菌株cx-2产生营养体亲和性分化。3、营养体亲和性分化菌株与原始菌株cx-2的致病力和AFLP指纹图谱上均没有差异,说明该病原菌营养体亲和性分化与致病力分化及AFLP指纹图谱的改变没有关系。4、营养体亲和性分化菌株与原始菌株cx-2对峙培养时在显微状态下观察到两菌株交接处有大量菌丝细胞融合后死亡的现象,而亲和性菌株在菌落交接处融合后能继续生长;不亲和性菌株对峙培养产生隔离带的原因与胞外分泌物无关;营养体亲和分化菌株与原始菌株cx-2互作后没有检查到细胞程序性死亡的DANladder。营养体亲和性分化菌株与原始菌株的蛋白质指纹图谱存在差异,部分营养体亲和性分化菌株(菌株8-5)与原始菌株相比蛋白差异点多大39个。营养体亲和性分化菌株8-5与原始菌株cx-2共培养互作后,其菌丝体蛋白图谱中有6个蛋白点的表达量与两菌株单独培养时菌丝体的表达量有差异。
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