PML重组体腺病毒用于胃癌基因治疗的实验研究

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hlwang72
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目的:研究PML重组体腺病毒对胃癌细胞株SGC-7901的生长抑制作用及其作用机制,探讨PML重组体腺病毒用于胃癌基因治疗的可能性。 方法:1将人PML全长cDNA插入穿梭质粒pSGCMV,再与腺病毒骨架质粒pPE3共转染293细胞后获得重组病毒。 2用不同滴度绿色荧光蛋白重组腺病毒(Ad-EGFP)感染胃癌细胞,在显微镜下计数绿色荧光蛋白阳性细胞数的比例以确定腺病毒对胃癌细胞株的感染能力。 3用重组病毒感染胃癌细胞SGC-7901,采用噻唑蓝比色法、流式细胞术以及免疫细胞化学法,对p53和bcl-2在肿瘤细胞内的表达以及细胞凋亡的定性与定量指标进行检测。 4用感染Ad-PML,Ad-blank和未经任何处理的胃癌细胞悬液裸鼠皮下注射,一月后观察细胞致瘤能力改变。 5用Ad-PML和Ad-blank在裸鼠种植瘤周围多点注射,一个月后测量肿瘤的体积及湿重。 结果:成功构建了重组体腺病毒Ad-PML,重组体腺病毒对胃癌细胞具有较强的感染能力;经腺病毒介导的PML处理的SGC-7901细胞的生长受到明显抑制,凋亡细胞发生率升高,与MOI值呈正相关。经腺病毒介导的PML处理的SGC-7901细胞内p53蛋白表达较对照组明显增加,bcl-2蛋白表达无明显变化。Ad-PML感染的胃癌细胞不能在裸鼠体内形成肿瘤。Ad-PML明显抑制了裸鼠种植瘤的生长。 结论:腺病毒介导的PML基因能在胃癌细胞SGC-7901中稳定、高效表达。PML能显著抑制SGC-7901细胞的体外、体内生长及其在裸鼠体内的致瘤能力。腺病毒介导的PML对人胃癌细胞的杀伤主要是通过诱导细胞凋亡,升提p53蛋白表达为其诱发胃癌细胞凋亡的机制之一。
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