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古树名木是大自然经过漫长的历史变迁,留给人类的宝贵遗产,具有重要的科学、文化和经济价值。为了传承历史文化,留传历史园林植物的宝贵遗传种质资源,本文以北京颐和园古树嫩枝及叶片为外植体进行组织培养试验研究,优化植物端粒酶活性测定方法,并研究了不同组织树木端粒酶的活性。以7种古树为材料,研究其组织培养的技术体系,主要结果:1、取颐和园西堤古柳外植体带有侧芽的茎条切段进行组织培养,以MS为基本培养基,附加不同浓度的6-BA和NAA进行分化诱导,其中最适启动培养基为不添加任何激素的MS培养基(2.0%蔗糖);最适不定芽诱导培养基及激素配比为MS+6-BA0.8 mg/L+NAA0.2mg/L+3.0%蔗糖;不定根最适诱导培养基为1/2 MS+NAA0.2 mg/L+1.5%蔗糖;2、取古楸带有侧芽的嫩茎条切段为外植体进行组织培养,其中最适启动培养基为MS+6-BA0.8 mg/L+NAA0.1 mg/L;最适分化培养基MS+6-BA1.8 mg/L+NAA0.3mg/L;不定根最适诱导培养基为1/2MS+IBA0.3 mg/L+NAA0.05 mg/L;3、取西府海棠当年新生嫩茎条切段为外植体进行组织培养,其中最适不定芽启动培养基1/2MS+IBA0.3 mg/L+NAA0.05 mg/L,将无菌苗接种到分化培养基MS+6-BA1.0 mg/L,+NAA 0.1 mg/L和MS+6-BA1.5 mg/L+NAA 0.4 mg/L上交替培养,组培苗生长健壮且分化率高,不定根最适诱导培养基为1/2MS+IBA0.80 mg/L和1/2MS+NAA1.00 mg/L;4、其余古桑、玉兰、木瓜、柿树生根较困难或者褐化现象严重,完整的组培体系正在建立中。古树随着年龄的增长逐渐走向衰老,而端粒长度、端粒酶活性与衰老密切相关。本文以人体宫颈癌细胞端粒酶活性测定技术为基础,优化了植物端粒酶活性测定方法,即21bp引物适合且使用量均为0.1μg,模板使用量最适为50ng-500ng,端粒DNA反应条件为26℃延长45min,PCR循环条件为:94℃/30s,65℃/30s,72℃/90s,循环33次。引物设计及实验结果表明,植物分生能力强的部位表现端粒酶活性;设计实验提高检测的灵敏度,排出了假阴性结果,改进的银染法使得实验结果更精确。作者对古楸树新生顶芽、组培苗以及古楸树愈伤组织的端粒酶活性进行比较,结果表明衰老、树龄与端粒酶活性可能存在一定的相关性。