目的念珠菌性阴道炎又称外阴阴道假丝酵母菌病（vulvovaginal candidiasis,VVC），是一种常见的外阴阴道炎，念珠菌属条件致病菌,对人体有致病性的共9种,其中致病力最强和最常见的是白色念珠菌。在儿童的外阴炎阴道分泌物中有较高的念珠菌检出率，且以白色念珠菌为主。近年来对白色念珠菌所致的复发性外阴阴道假丝酵母菌病的发病机制尤其是免疫学机制的研究有一些新的进展,发现Th1和Th2两种细胞之间的免疫平衡异常在复发性外阴阴道假丝酵母菌病的发病中起了关键的作用,蛋白激酶C（PKC）在Th2细胞的反应中起着至关重要的作用，本文通过应用PKC抑制剂----GF109203X抑制PKC活性，从而阻断T淋巴细胞活化，使实验动物体内IFN-γ、IL-10的表达改变，进而改变Th1、Th2的平衡状态达到治疗念珠菌性阴道炎的目的，从细胞因子角度阐明念珠菌性阴道炎发病的机制。通过动物模型的研究为临床应用PKC抑制剂治疗VVC病人提供理论依据。方法1实验动物及分组将购买的昆明雌性小鼠(性成熟未交配，体重25g±5g)饲养一周，（排除环境对其影响）,饲养一周后每只雌性小鼠用无菌PBS液冲洗阴道后取其冲洗液进行培养，无白色念珠菌生长的小鼠确定为实验对象，随机拿出12只小鼠作为空白对照组（A组），剩下60只小鼠隔日皮下注射苯甲酸雌二醇0.05ml/只（苯甲酸雌二醇的半衰期为2-3d），共3次，使之处于假发情状态后，在沙保弱培养基上挑取已分离纯化的白色念珠菌标准菌株ATCC10231，用PBS液将上述菌液浓度稀释至7.5×106CFU/ml，在接种日灌注前用无菌PBS液反复冲洗小鼠阴道后，取20μl上述配制好的菌液注入小鼠阴道内，灌注后每只小鼠倒置5min，保证菌液进入小鼠的阴道并充分与阴道接触，连续7d，空白对照组不做任何处理，只是和实验组小鼠同时饲养。感染7d后观察实验小鼠全身情况，空白对照组小鼠一般情况可，好动，毛发致密、光滑，毛色光亮，进食情况好，感染后小鼠精神萎靡，毛发稀疏、粗糙，毛色无光泽，进食情况减少，感染小鼠阴道口有充血、红肿，且有较多分泌物，取小鼠阴道分泌物进行培养后有念珠菌生长，表明感染成功。将感染成功的小鼠随机分为感染成功后立即处死组（B组）12只(即感染成功后处死取其上清保存)、感染后不治疗组（C组）12只、感染后阴道用药3d组（D组）12只、感染后阴道用药5d组（E组）12只、感染后阴道用药7d组（F组）每组均多准备2只老鼠，共84只。2实验方法将所有昆明小鼠按表1行眼静脉取血后在室温下自然凝固10--20min后放入高速离心机离心20min（3000转/分）后仔细收集上清行ELISA实验检测其血清中白介素-10（Interleukin-10，IL-10）、干扰素—γ（Interferon-γ，IFN-γ）浓度，摘取小鼠阴道组织标本固定于10%福尔马林中送大理学院附属医院病理科进行石蜡包埋，0.5μm切片行HE（苏木精-伊红）染色；根据算出的IFN-γ、IL-10的值算出IFN-γ和IL-10的比值并用此来表示小鼠体内Th1和Th2的比值情况，从而了解应用PKC抑制剂-GF109203X后Th1/Th2的变化情况。其中B组小鼠行HE染色同时行PAS染色（观察小鼠阴道腔的菌丝及孢子，进一步证明小鼠的阴道炎症为白色念珠菌所致）；A组和C组取眼静脉血及阴道组织时间与F组相同。3各种计算方法3.1IL-10、IFN-γ及Th1/Th2值计算方法按说明书要求用ELISA法分别测出小鼠血清中IL-10和IFN-γ的浓度，以标准物为横坐标，OD值为纵坐标，通过绘出的标准曲线中的回归方程式计算出IL-10和IFN-γ的实际浓度；根据IL-10、IFN-γ的实际浓度算出IFN-γ和IL-10的比值并用此来表示小鼠体内Th1和Th2的比值。3.2小鼠阴道感染评分标准及评分表小鼠阴道炎症评分标准：0分：小鼠阴道口无充血、水肿及分泌物增多；1分：小鼠阴道口轻微充血、水肿，无分泌物增多；2分：小鼠阴道口明显红肿伴分泌物增多；3分：小鼠阴道口充血、水肿明显，出现溃疡，并伴有分泌物增多；4分：小鼠死亡。3.3小鼠阴道组织切片评分标准及评分表小鼠阴道组织标本按照充血、水肿、出血、浸润4项指标对小鼠阴道切片变化情况评定，每一项为一分。3.4统计方法采用SPSS17.0软件进行统计学分析和处理，所有数据均以均数加减标准差（x±s）表示。感染后立即处死组与感染后未治疗组均数间比较、感染后立即处死组与治疗各组之间均数的比较、治疗各组间用药时间均数比较采用单因素方差分析，各因素间关系采用Spearman相关性分析，均以ɑ=0．05为检验水准，P＜0.05有统计学意义。结果（1）B组、C组小鼠血清IL-10值高于A组，IFN-γ、Th1/Th2值低于A组，差异有统计学意义（P＜0.05），小鼠阴道感染评分及阴道组织切片评分均高于A组。（2）D、E、F组小鼠血清IL-10值高于A组，IFN-γ、Th1/Th2值低于A组，差异有统计学意义（P＜0.05）。小鼠阴道感染评分及阴道组织切片评分均高于A组。（3）C组小鼠血清中IL-10值低于B组，IFN-γ值高于B组，差异有统计学意义（P＜0.05），Th1/Th2值高于B组，差异无统计学意义。小鼠阴道感染评分及阴道组织切片评分均与B组无差异。（4）D、E、F组与B、C组比较小鼠血清中IL-10的值逐渐下降，IFN-γ、Th1/Th2值逐渐增高，差异有统计学意义（P＜0.05）。D组、E组、F组小鼠阴道感染评分及阴道组织切片评分均低于B组、C组。（5）E组与D组比较小鼠血清中IL-10值降低，差异有统计学意义（P＜0.05），IFN-γ、Th1/Th2值升高，差异无统计学意义。E组小鼠阴道感染评分及阴道组织切片评分均低于D组。（6）F组与D组比较小鼠血清中IL-10值降低，IFN-γ、Th1/Th2升高（P＜0.05）。F组小鼠阴道感染评分及阴道组织切片评分均低于D组。(7）F组与E组比较小鼠血清中IL-10值降低，IFN-γ、Th1/Th2升高（P＜0.05）。F组小鼠阴道感染评分及阴道组织切片评分均低于E组。结论1．感染念珠菌性阴道炎后小鼠血清中IL-10升高，IFN-γ、Th1/Th2下降（P＜0.05），细胞因子的变化导致Th1/Th2发生免疫偏移；小鼠精神萎靡，毛发稀疏，无光泽，进食量降低，阴道炎及阴道组织切片评分高。2．阴道应用PKC抑制剂--GF109203X后小鼠血清中IL-10值逐渐降低，IFN-γ、Th1/Th2值逐渐上升，小鼠一般情况好转，阴道炎及阴道组织切片评分下降，表明GF109203X可通过降低念珠菌性阴道炎小鼠血清中IL-10值，升IFN-γ、Th1/Th2值，来对Th1/Th2的偏移起到调节作用。3．阴道应用PKC抑制剂--GF109203X对于因Th1/Th2的免疫偏移引起的小鼠念珠菌性有阴道炎有一定治疗作用，且延长阴道用药时间对于小鼠的念珠菌性阴道炎的治疗作用增加。