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本文对地衣芽孢杆菌可高效转录β-半乳糖苷酶基因强启动子的克隆、鉴定进行了研究。主要内容如下:
(1)筛选并直接应用了发酵液低温离心后的上清液样品与蛋白上样缓冲液以1:1比例混合的方法,再按照SDS-PAGE聚丙烯凝胶电泳规定的步骤对试验进行处理和操作,取得了较为满意的SDS-PAGE聚丙烯凝胶电泳图;
(2)筛选出了转录活性强的启动子。构建出了地衣芽胞杆菌基因组的部分基因组文库,并成功的运用鸟枪打靶的方法应用启动子探针载体克隆出了一批具有强转录活性的启动子;
(3)通过对强启动子pB9核酸序列组成进行测定并与地衣芽孢杆菌基因组DNA序列进行了对比,表明强启动子pB9来源于地衣芽孢杆菌LuxS基因,为来源正确的启动子;
(4)应用启动子预测软件预测与分析,找到了其功能元件的位置,表明pB9具有典型的原核生物启动子结构。