人细胞色素P450 2A13在非小细胞肺癌中的表达及CYP2A13慢病毒载体的构建

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目的比较细胞色素P4502A13mRNA和蛋白在非小细胞肺癌及其对应癌旁正常组织中的表达水平,探讨细胞色素P4502A13与肺癌的相关性及其临床意义。构建人细胞色素P4502A13(CYP2A13)基因与绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)共表达的慢病毒载体,并转染肺腺癌A549细胞使之持续高表达CYP2A13基因。方法采用荧光定量PCR和Western-blot技术检测35例肺癌组织及其对应癌旁组织中P4502A13mRNA和蛋白表达情况,并分析癌组织中CYP2A13的表达与病人的性别、年龄、病理分型、淋巴结转移等临床病理参数的关系。结果采用SPSS17.0统计软件进行统计学处理(α=0.05)。采用基因重组技术,将CYP2A13基因与GFP连接,构建慢病毒载体。转染293T细胞,包装后产生病毒液,测定其滴度。包装后的病毒感染A549细胞。激光共聚焦显微镜观察转染慢病毒载体的A549细胞;Real-time PCR和Western-blot检测A549细胞中CYP2A13表达情况。结果荧光定量PCR结果表明,在35对肺癌组织中,CYP2A13mRNA在癌组织中的表达与癌旁正常组织表达无差异(P>0.05);在12对鳞癌样本中,CYP2A13mRNA在癌组织中的表达与癌旁正常组织表达无差异(P>0.05);在23对腺癌组织中,CYP2A13mRNA在癌组织中的表达是癌旁正常组织的0.125倍(P<0.05),差异有统计学意义。肺癌组织中CYP2A13mRNA的表达与患者的年龄、性别、病理分型及淋巴结转移均无关(P>0.05)。相同组织中,CYP2A13蛋白的表达与mRNA的表达是一致的。成功构建人细胞色素CYP2A13基因与GFP共表达的慢病毒载体,转染293T细胞后,荧光显微镜下可见有大量的绿色荧光。Real-time PCR和Western blot检测到A549细胞中CYP2A13的高表达。结论本次研究表明,CYP2A13在肺腺癌组织中表达下调,说明CYP2A13在肺腺癌中可能扮演肿瘤抑制因子的作用,CYP2A13基因可能在肺腺癌的发生发展过程中起着重要作用。成功构建了CYP2A13与GFP基因共表达的慢病毒表达载体,为研究CYP2A13基因与呼吸系统肿瘤的关系,提供了稳定的感染细胞的载体。
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