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联苄类化合物是近年来从石斛属植物中分离得到的酚类化合物,是石斛属植物的特征性活性成分。联苄化合物的活性已有广泛的文献报道,具有抗氧化、抗炎、镇痛解痉、抗血小板凝聚,抗肿瘤等活性,但是在其结构-代谢方面的研究还基本处于空白。本课题通过对联苄类化合物的体内、体外代谢产物的分析鉴定,阐明石斛中联苄类成分的代谢途径,为解析联苄类成分在体内发挥作用的药效基础及探讨其作用性质和机制提供科学依据。
本论文通过体外、体内两方面对联苄类成分的代谢进行研究。体外研究方法主要是肝微粒体孵育体系,对几种联苄类化合物的代谢产物进行分析鉴定。体内研究方法是对大鼠给予一定剂量的化合物后,收集胆汁、尿液和粪便等生物样品,然后采用UPLC/Q-TOFMS的分析方法从胆汁、尿液和粪便中鉴定化合物代谢产物。
本论文的主要结论如下:1.分别建立了体外肝微粒体Ⅰ相、Ⅱ相和共孵育体系,采用UPLC/Q-TOFMS,对联苄类成分的体外肝微粒体孵育代谢产物进行检测鉴定,总结联苄类成分的Ⅰ相代谢的主要途径为脱氢氧化、羟基化、去甲基等。体外肝微粒体孵育体系制备石斛酚的两个主要的Ⅰ相脱氢氧化产物,并通过核磁对其结构进行初步解析。
2.采用UPLC/Q-TOFMS的分析技术,通过高分辨质谱准确分子量及二级裂解碎片的分析,对大鼠口服给药联苄类代表性化合物石斛酚后的尿液、胆汁和粪便样品进行检测和分析,共检测并鉴定了11个体内代谢产物。研究表明,石斛酚的体内代谢途径主要为葡萄糖醛酸化。石斛酚经过脱氢氧化、去甲基等Ⅰ相代谢途径后,进一步进行葡萄糖醛酸结合反应。其中尿液中的代谢产物最为丰富,包括了检测到的所有11个代谢产物;粪便中没有检测到相应的代谢产物;胆汁中主要检测到的代谢产物为原型脱氢氧化后的葡萄糖醛酸结合产物。
根据联苄类成分的结构特点,其体内外代谢途径具有相似性,总结归纳为脱氢氧化、羟基化、去甲基和葡糖糖醛酸化。