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背景与目的鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）是一种发生于鼻咽部黏膜上皮的恶性肿瘤,发病率在头颈部恶性肿瘤中占首位,是我国常见的恶性肿瘤之一。根据国际癌症研究机构发表的GLOBOCAN 2020癌症发病率和死亡率统计,在全球范围内,新增鼻咽部肿瘤确诊病例133354例,死亡病例80008例。目前认为,鼻咽癌的发生主要与EB病毒感染、遗传和环境等因素有关。治疗手段有放射治疗、化疗及靶向治疗等。p63（tumor protein,TP63/p63）是p53转录因子家族的成员,在鳞状上皮的发育中起重要作用。p63包含在氨基末端有T/A或△/N结构域的两种蛋白质亚型,同时又有多种异构体,其中△Np63α（p40）是复层鳞状上皮中主要的p63异构体,定位于基底细胞,在皮肤、头颈部和肺等多器官部位的鳞癌中高表达。不同的p63亚型已被证明会影响不同的细胞、组织和疾病,同时通过多种途径来实现这些功能。表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）是Erb B酪氨酸激酶受体家族的四个成员之一,在细胞增殖和分化过程中起着至关重要的作用,特别是在上皮细胞中。异常激活或表达失调的EGFR通过多条信号通路影响肿瘤的发生发展。在超过90%的头颈部恶性肿瘤中可以检测到EGFR高表达,并与患者较差的预后相关。EGFR的激活导致受体酪氨酸激酶的自身磷酸化,从而启动下游PI3K/AKT/m TOR、Ras/Raf/MEK/ERK-MAPK等信号通路,进而影响基因表达,细胞增殖、凋亡、转移、粘附及血管生成。NPC在免疫组织化学上表达出鳞状表型,即p63、p40呈弥漫性核阳性。然而在临床病理诊断中发现有少数NPC并不表达鳞状表型,从而给这类鼻咽癌的归类及分型带来困扰。本课题组暂将此类鼻咽癌称为非鳞状免疫表型鼻咽癌（non-squamous immunophenotype nasopharyngeal carcinoma,NSNPC）。课题组前期研究发现,NSNPC的组织学形态、病原学及基因改变均与经典鼻咽癌类似,超微结构结果显示其仍属于非角化鳞癌中的未分化型,随访结果显示NSNPC恶性程度较低,预后较好。但其不表达p63、p40的原因尚不明确。针对前期研究成果,本研究进一步探究了NSNPC的分子机制以及生物学行为,为相关研究提供理论基础。研究方法1.免疫组织化学法检测NSNPC与经典鼻咽癌组织样本中EGFR/PI3K/AKT/m TOR通路、NOTCH通路、STAT3通路相关分子蛋白的表达情况收集郑州大学第一附属医院病理科2011年至2021年诊断为NSNPC的病例22例,同时收集经典鼻咽癌患者（p63和p40均阳性表达）20例为对照组。免疫组织化学法检测两组NPC中EGFR、PI3K、AKT、m TOR、p-AKT、p-m TOR、NOTCH、STAT3、p-STAT3的表达情况。2.验证鼻咽癌细胞系中EGFR通过PI3K/AKT/m TOR通路调控p63表达将EGFR干扰质粒、过表达质粒分别转染到鼻咽癌细胞株CNE-2、5-8F中,通过q RT-PCR、Western Blot实验检测m RNA和蛋白水平PI3K/AKT/m TOR通路相关分子及p63表达情况。3.探究通过EGFR调控p63表达对鼻咽癌细胞生物学行为的影响通过质粒敲低、过表达EGFR并成功调控p63表达后,运用CCK-8实验、划痕实验及Transwell实验检测其对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。研究结果1.免疫组织化学结果显示,相比于经典鼻咽癌组,低表达p63的NSNPC组中EGFR、PI3K、p-AKT、p-m TOR蛋白表达水平均降低,差异均有统计学意义,而两组NPC中AKT、m TOR、NOTCH、STAT3、p-STAT3的表达无明显差异。这表明,在NSNPC中EGFR可能通过PI3K/AKT/m TOR通路调控p63的表达。2.q RT-PCR实验结果显示,在鼻咽癌细胞系CNE-2、5-8F中,使用sh RNA敲低EGFR后,p63表达降低;过表达EGFR后,p63表达增高,差异有统计学意义,这提示EGFR可调控p63表达。Western Blot实验结果显示,CNE-2、5-8F细胞系中敲低EGFR后,PI3K、p-AKT、p-m TOR、p63蛋白表达降低;过表达EGFR后,PI3K、p-AKT、p-m TOR、p63蛋白表达增高,差异有统计学意义。证实在鼻咽癌细胞中可通过EGFR调控PI3K/AKT/m TOR通路影响p63表达。3.CNE-2、5-8F细胞系中过表达EGFR后p63表达增高,细胞的增殖、迁移、侵袭能力增强;反之,敲低EGFR后p63表达降低,细胞的增殖、迁移、侵袭能力减弱。结论1.非鳞状免疫表型鼻咽癌中不表达p63与EGFR/PI3K/AKT/m TOR通路被抑制有关。2.下敲EGFR,p63低表达可抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力。