高通量单细胞包埋的微液滴在肿瘤MMP9酶活性检测中的应用

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恶性肿瘤细胞转移造成的各种癌症疾病严重威胁着人类的生命健康。肿瘤细胞的入侵转移伴随着人体的新陈代谢过程从病灶组织向四周扩散,从而导致更多器官组织产生病变。研究表明,约90%的癌症死亡案例与肿瘤细胞扩散有关。发展一种在单细胞水平的基础上,检测恶性肿瘤细胞入侵相关基质表达的敏感检测手段至关重要。近年来,微流控技术的兴起为生化分析提供了一个全新的工具,因其具有功能化的复杂结构通道,对试剂需求少,检测限低等优势,被广泛应用于分子生物学,化学分析,医疗诊断等研究领域。本硕士论文基于微流控系统中的液滴微流控技术,开发了一种异于常规微流控芯片的玻璃毛细管微流控装置。该装置是由商业化的T型色谱接头与玻璃毛细管组装而成,相比较微流控芯片的加工工艺,我们的装置大大降低了实验成本,组装极其容易,清洗简单,并且能重复稳定的生成尺寸均一的微液滴。在此基础上,我们利用该装置实现恶性肿瘤细胞单细胞水平的封装,很好地探究了恶性肿瘤细胞上基质金属蛋白酶的活性表达,从而为我们评估恶性肿瘤细胞转移入侵产生潜移默化的帮助。主要的研究内容概括如下:第一章:简要介绍了微流控技术的起源,微全分析系统的特点与优势及微流控芯片的加工工艺与应用领域。在微流控体系中重点介绍了液滴微流控技术,涉及微液滴的生成方法、特征优势与应用领域。第二章:我们利用商业化的T型三通接头与玻璃毛细管组装一套全新的玻璃毛细管微流控装置,利用该装置我们成功的制备了三种不同类型的微液滴,它们分别是油包水型、水包油型和油包水凝胶型微液滴。其中利用该装置主要探究油包水凝胶型微液滴的稳定性,实验的重复性,液滴的可操控性及水凝胶体系的探究。第三章:利用我们开发的玻璃毛细管微流控装置,以油包水凝胶微液滴为平台,实现单个恶性肿瘤细胞的封装,并重点探究了在肿瘤细胞入侵中起着关键作用的基质金属蛋白酶(MMP9)的活性表达。我们将单个肿瘤细胞与一段特定设定的多肽序列一起封装在微液滴中,通过细胞被刺激物作用后分泌出的MMP9酶与多肽作用产生荧光信号来研究酶的活性表达,从而为我们评估肿瘤细胞入侵提供了一种敏感的检测手段。总之,本硕士论文利用液滴微流控技术实现单细胞的捕捉,并且探究了恶性肿瘤细胞中基质金属蛋白酶的活性表达,为人类癌症早期诊断与治疗提供了一种敏感的检测手段。
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