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研究背景：特发性肺纤维化(IPF)是一种以肺内成纤维细胞不明原因的异常增殖形成瘢痕组织为主要特征的进行性肺部纤维化疾病,其病理机制目前还不清楚。有研究表明Wnt/β-catenin信号通路在成纤维细胞激活、增殖过程中具有重要调节作用,同时在IPF病人的肺组织中也发现了Wnt/β-catenin信号通路的异常激活。另外,由于骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)具有分化为包括上皮细胞谱系在内的多向分化潜能,有研究试图利用BM-MSCs分化为肺泡上皮细胞来修复肺纤维化,但因BM-MSCs具有向上皮细胞或成纤维细胞分化的双向分化可能,具体修复效果目前尚无定论。有研究证实Wnt/β-catenin信号通路参与了BM-MSCs向上皮细胞的分化。考虑到Wnt/β-catenin信号通路在以上过程中的重要作用,本实验以该信号通路为靶点,采用小鼠腹腔注射Wnt/p-catenin言号通路抑制剂XAV939以观察其对博来霉素诱导的肺纤维化的作用；同时运用Trans-well细胞共培养技术构建小鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)与肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ细胞)共培养诱导分化体系,以观察在共培养条件下XAV939对BM-MSCs向肺泡上皮细胞分化过程的影响。这将为通过抑制Wnt/p-catenin信号通路治疗肺纤维化这一新思路提供重要的实验基础。研究目的：1、确认XAV939能够抑制博来霉素诱导的小鼠肺纤维化的发展；2、构建BM-MSCs与ATⅡ细胞共培养诱导分化体系,证明在共培养条件下XAV939能够促进BM-MSCs向肺泡上皮细胞分化。研究方法：1、采用SPF级雄性十周龄C57BL/6小鼠腹腔麻醉后鼻腔滴注博来霉素。分别于给药后第7天、14天和21天处死小鼠,采用组织切片染色、羟脯氨酸含量测定、RT-PCR和Western blot等技术检测肺纤维化的发生、发展以及Wnt/β-catenin信号通路中相关因子的表达情况。2、在小鼠肺纤维化模型建立的基础上,于博来霉素鼻腔滴注后第10天开始腹腔注射XAV939,连续注射7天。在第17天处死小鼠,采用组织切片染色、羟脯氨酸含量测定、]RT-PCR和Western blot等技术检测肺纤维化的发生、发展以及Wnt/β-catenin信号通路中相关因子的表达情况。3、小鼠鼻腔滴注高剂量博来霉素(17天大部分死亡的剂量),在第10天开始腹腔注射XAV939,连续注射7天。每天观察并记录小鼠死亡情况。4、采用CCK-8法体外检测XAV939对NIH-3T3成纤维细胞增殖能力的影响。5、运用Trans-well方法建立BM-MSCs与ATII细胞的共培养体系。将两种细胞以8：1的比例分别接种到六孔板和小室内,并在培养基中加入XAV939。连续共培养至14天,用免疫荧光、RT-PCR和Western blot等技术检测诱导分化的BM-MSCs中肺泡上皮细胞标记角蛋白18(Keratin18, Krt18)、角蛋白19(Keratin19, Krt19)、闭合蛋白(Occludin, Ocln)以及表面活性蛋白C (Surfactant protein C, Sftpc)的表达情况。研究结果：1、博来霉素可以诱导小鼠肺纤维化,在此过程中伴有Wnt/β-catenin信号通路的激活。鼻腔滴注博来霉素引起肺泡间出现炎症细胞弥漫浸润,纤维组织增生,肺泡间隔显著增宽,肺间质中胶原纤维沉积量加大,纤维化相关分子表达量上升；同时伴有Wnt/β-catenin信号通路相关因子表达上调,组织内β-catenin含量上升。2、XAV939能够抑制Wnt/p-catenin信号通路的激活并修复肺组织、抑制肺纤维化的发展。在腹腔注射XAV939后,Wnt/β-catenin信号通路和纤维化相关因子表达下调,组织内β-catenin含量下降,纤维组织增生面积显著减少,胶原纤维沉积量降低。3、XAV939提高了鼻腔滴注高浓度博来霉素后小鼠的生存率。4、XAV939能够抑制NIH-3T3成纤维细胞的增殖活力。5、运用Trans-well技术成功建立了BM-MSCs与ATⅡ细胞共培养诱导体系。在共培养体系中,XAV939能够促进BM-MSCs呈现上皮样形态,表达上皮细胞特异性标记Krt18, Krt19, Ocln以及Sftp。结论：在体内实验中,我们证实XAV939可以抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活并促进纤维化肺组织的修复,提高高浓度博来霉素损伤后小鼠的生存率；在体外实验中,XAV939可以抑制NIH-3T3成纤维细胞增殖,促进共培养体系中BM-MSCs向肺泡上皮细胞分化。这为进一步研究Wnt/β-catenin信号通路与肺纤维化的发生、发展得关系提供了一定的实验基础,对肺纤维化的治疗具有临床指导意义。