研究背景和目的:近年来,呼出气检测作为探索人体生理病理过程的一种无创的检测方式,越来越受到人们的重视。20世纪中叶,Linus Paulin等应用气相色谱技术对人体呼出气进行分析,首次提出了“指纹图谱”的概念,由此引发了呼出气研究的快速发展。目前在人体呼出气体中检测出3000多种挥发性化合物,这些化合物包括烯烃类、烷烃类、醛酮类化合物、含氮化合物及含硫化合物等。肝脏疾病是一种由多种原因引起在我国常见的疾病,最多见的是病毒性肝炎,包括乙肝,丙肝,酒精,血吸虫,药物,自身免疫性肝病等,而乙肝一度在我国达1.2亿,对肝病的研究显得尤为重要,本研究利用EESI-MS分析技术对健康志愿者、Child A、Child B及Child C患者的呼出气进行了初步的探索性的研究。方法:1.根据CHILD评分标准收集2015年6月至2017年1月南昌大学第一附属医院感染科收入住院的134例肝病患者临床资料及实验室检查[包括年龄、性别、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)、白蛋白(ALB)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶原时间活动度(PTA)、HBV-DNA]。采用Child-Pugh分级标准,将病人分为A,B,C三组。并同时纳入健康志愿者27例,分别收集每组受试者的呼出气。2.萃取剂配置按照甲醇/水体积比为1:1,再加10%体积乙酸配制成10ppm的硝酸银溶液,搭建封闭式电喷雾萃取电离质谱(EESI-MS)实验装置,并对收集的呼出气进行检测分析,得到其质谱图。3.数据分析采用Xcalibur数据系统、偏最小二乘分析(PLS)、SPSS17.0统计软件逐步处理数据,分析健康志愿者、Child A、Child B及Child C患者的呼出气之间的差异,应用裂解分析(DIC)、串联质谱分析、标品对照、代谢数据库等,鉴定有差异的化合物,并分析相应化合物与肝病之间的联系。结果:1.应用偏最小二乘分析(PLS)初步分析健康志愿者与Child A、健康志愿者与Child B、健康志愿者与Child C患者之间的呼出气,其中健康志愿者与Child A患者呼出气之间无明显差异,健康志愿者与Child B患者、健康志愿者与Child C患者及Child B与Child C患者呼出气之间有差异。2.健康志愿者与Child-pulgB患者呼出气之间存在有差异的变量,我们选取VIP阈值为1.7时,挑选出其中差异最大的变量。经两独立样本T检验对差异变量进一步筛选,得到个9有显著性差异的变量。健康志愿者与Child-pulgC患者呼出气之间存在有差异的变量,我们选取VIP阈值为1.75时,挑选出其中差异最大的变量。经两独立样本T检验对差异变量进一步筛选,得到个17有显著性差异的变量。Child-pulgB与Child-pulgC患者呼出气之间存在有差异的变量,我们选取VIP阈值为1.8时,挑选出其中差异最大的变量。经两独立样本T检验对差异变量进一步筛选,得到个5有显著性差异的变量。在指纹谱图中找出每一个差异变量相应的高分辨精确值,最终确定其对应的可能物质。3.健康志愿者与Child-pulgB患者呼出气之间存在的差异物质:有差异的物质有9种,鉴定出6种,异丁烯(m/z 57),丙酮(m/z 59),乙醇醛(m/z 61),2-丁酮(m/z 73),环戊酮(m/z 85),2-乙基丙烯酸(m/z 101)。健康志愿者与Child-pulgC患者呼出气之间存在的差异物质:有差异的物质有17种,鉴定出12种,异丁烯(m/z 57),丙酮(m/z 59),乙醇醛(m/z 61),异戊二烯(m/z 69),2-丁酮(m/z 73),环戊酮(m/z 85),2,5-二甲基呋喃(m/z 97),2-乙基丙烯酸(m/z 101),2-甲基丁酸(m/z 103),6-甲基己烷-2-酮(m/z 115),辛醛(m/z129),乙醇醛的络合物(m/z 121)。Child-pulgB与Child-pulgC患者呼出气之间存在的差异物质:有差异的物质有5种,鉴定出3种,均为乙醇醛的络合物(m/z 105、m/z 175、m/z 189)。结论:1.PLS可区分健康志愿者与Child B患者、健康志愿者与Child C患者及Child B与Child C患者呼出气,三者呼出气之间存在差异;2.在三组受试者呼出气中,我们鉴定出的化合物15种,每两组之间有差异的化合物互相有重叠,已经鉴定出的15种化合物分别为异丁烯(m/z 57),丙酮(m/z 59),乙醇醛(m/z 61),异戊二烯(m/z 69),2-丁酮(m/z 73),环戊酮(m/z 85),2,5-二甲基呋喃(m/z 97),2-乙基丙烯酸(m/z 101),2-甲基丁酸(m/z 103),6-甲基己烷-2-酮(m/z 115),辛醛(m/z 129),乙醇醛的络合物(m/z 105、m/z 121、m/z 175、m/z 189),还有一些差异变量未能鉴定出具体为哪种化合物,还需进一步的研究工作。可初步推测出上述化合物与肝病之间的联系。但对其在肝脏疾病中的意义有待进一步的深入研究。