【摘 要】
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奶牛乳腺炎（Bovine mastitis）是危害奶牛健康和影响奶业发展常见而重要的奶牛疾病,金黄色葡萄球菌（S.aureus）是引起奶牛乳腺炎的重要病原菌。随着S.aureus的耐药性不断增强,特别是多耐药性菌株不断增加以及人们对无抗奶的要求,使用药物治疗S.aure us引起的奶牛乳腺炎无效且受到严格限制。因此,人们积极探索使用疫苗来预防S.aureus引起的奶牛乳腺炎。在此前的研究中,我们已
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奶牛乳腺炎（Bovine mastitis）是危害奶牛健康和影响奶业发展常见而重要的奶牛疾病,金黄色葡萄球菌（S.aureus）是引起奶牛乳腺炎的重要病原菌。随着S.aureus的耐药性不断增强,特别是多耐药性菌株不断增加以及人们对无抗奶的要求,使用药物治疗S.aure us引起的奶牛乳腺炎无效且受到严格限制。因此,人们积极探索使用疫苗来预防S.aureus引起的奶牛乳腺炎。在此前的研究中,我们已经用S.aureus铁调节的表面决定簇B（IsdB）的免疫优势片段IsdB137-361与链球菌抗原成分构建了,同时预防S.aureus和链球菌感染的奶牛乳腺炎候选疫苗（命名为GIT）。为了检测该候选疫苗免疫奶牛后产生的S.aureus IsdB137-361相关抗原的血清抗体,我们用pGEX-6p-1载体表达的IsdB137-361蛋白作抗原建立了牛血清抗体间接ELISA检测方法。通过对抗原包被浓度、血清稀释倍数和反应条件进行优化,确定cut-off值,检测了血清交叉反应性和敏感性。结果显示,最佳抗原使用浓度为2.5μg/m L,血清稀释度为1:1000,以p H 9.6的碳酸盐缓冲液稀释抗原后于4℃包被12 h、含5%脱脂乳的PBST于37℃封闭30 min、加入血清后于37℃孵育15min为工作条件。批内变异系数为4.3%～9.7%,批间变异系数为3.3%～9.2%,均小于10%,说明该方法稳定性良好。在cut-off值为0.45时,该间接ELISA牛血清检测方法具有良好的特异性和敏感性,并对84份临床样本进行检测,共检出阳性样本25份,阳性率为28.74%。以上研究表明,用pGEX-6p-1载体表达的IsdB137-361蛋白作抗原所建立的间接ELISA检测方法,可用于IsdB137-361相关抗原疫苗免疫牛血清抗体检测。该研究为奶牛乳腺炎候选疫苗GIT临床实验的IsdB137-361相关抗体检测提供了技术支撑。
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