手足口病(hand-foot-and-mouth disease, HFMD)是一种常见于儿童的,以发热和手、足、口腔等部位的皮疹、疱疹或疱疹性咽峡炎为主要特征的急性传染病。少数患者可并发无菌性脑膜炎、脑干脑炎、神经源性肺水肿、急性迟缓性麻痹和心肌炎等。引起手足口病的病原体主要为肠道病毒,包括埃可病毒(Echo viruses)、柯萨奇病毒(Coxsachievirus) A组(4、5、9、10、16型)和B组(2、5型)、肠道病毒71型(Enterovirus71, EV71),其中以EV71和CoxA16最多见。EV71因其可引起中枢神经系统并发症,有较高的病死率和致残率,严重危害儿童生命健康,日益引起人们的普遍关注。手足口病是全球性的传染病,进入20世纪90年代以来,EV71逐渐成为全球手足口病的主要病原体,特别是在亚太地区均有EV71型手足口病流行的报道。2008年,在我国安徽省阜阳市爆发大规模的手足口病疫情,累计病例达9446例n]。2008年5月2日,我国将手足口病纳入丙类法定传染病进行管理。手足口病传染性强、传播途径复杂,人群对EV71普遍易感,4岁以下学龄前儿童是本病的易感人群,在EV71流行期间,幼儿园、托儿所常可发生集体感染。EV71型手足口病属急性自限性疾病,感染后可获得特异性免疫力,对同型病毒可产生持久免疫,保护机体免受再次感染。由于EV71病毒没有包膜,所以对乙醚、脱氧胆酸盐、去污剂、普通消毒剂以及弱酸有一定的抵抗性,有机物对病毒有保护作用,EV71在粪便和污水中可存活数月[御,使得EV71在人际问传播的潜在危险性增大。由于目前尚无特效抗病毒药物和特异性的治疗手段,各类疫苗也尚在临床试验阶段,因此通过采取控制传染源、阻断传播途径的防控措施对控制手足口病的流行至关重要。本研究主要针对上海地区儿童重症手足口病的流行特征及病原分布、粪便和咽拭配对标本的EV71检出情况、轻重症手足口病病例EV71分离株的全基因组特征、EV71外界生存能力、学龄前J儿童对EV71的易感进行研究,并对看护点儿童手足口病防控措施进行初探,主要包括以下五个部分：1.2011年上海地区儿童重症手足口病流行特征及病原检出情况分析：对2011年上海市闵行区儿童重症手足口病的流行特征、病原分布以及不同病程重症手足口病病例粪便和咽拭配对标本的病原检出情况进行分析发现,2011年上海市闵行区共报告重症手足口病例364例,主要集中在1-3岁儿童,占总病例数的65.93%,尤以1岁组儿童人数最多占40.38%,此后随着年龄增加病例数依次减少,且散居儿童人数最多占78.88%；男女性别之比为1.98：1；重症病例有明显的时间分布,5-7月为发病高峰占46.43%,11月出现一个次高峰；多数重症病例有病前1周可疑的流行病学接触史。364名重症手足口病病例的病原学检测结果显示,重症病例多由EV71感染引起。114例EV71感染的重症手足口病病例的粪便和咽拭配对标本检测结果显示,粪便标本EV71检出率(98.25%)高于咽拭标本(50.00%)；患者病后随着时间的推移,粪便和咽拭标本的检出率均有所下降,但在发病后第14天仍可检出EV71,发病后8-14天咽拭标本的EV71检出率仍可达47.37%。研究结果表明,2011年上海市闵行区重症手足口病病例有明显的时间、人群分布；重症病例粪便标本EV71检出率高于咽拭,采集粪便标本对疾病的病原学诊断更有意义；病后两周咽拭标本仍有较高的检出率,提示虽然粪口途径是手足口病传播的主要方式,但EV71通过呼吸道传播也不容忽视。2.2012年上海地区健康婴幼儿EV71血清学研究：为了解上海地区健康婴幼儿对EV71的自然感染状况及不同年龄、性别婴幼儿对EV71的易感性,探讨不同月龄婴幼儿血清EV71中和抗体的流行趋势。对2012年6-8月采集的上海地区449份0-4岁健康婴幼儿血清标本,进行微量细胞病变法检测血清EV71中和抗体。结果显示,449份健康婴幼儿血清EV71中和抗体阳性率为43.65%(196/449),中和抗体几何平均滴度(GMT)为1：10.43。不同性别婴幼儿的血清中和抗体阳性率差异无统计学意义。血清EV71中和抗体水平与年龄有密切关联,随着年龄的增长,中和抗体水平呈先下降后上升的趋势。小于1月的新生儿,其血清EV71中和抗体水平最高,抗体阳性率高达100.00%,GMT为1：60.41,随着月龄增加,中和抗体水平逐渐降低,5个月后婴儿血清EV71中和抗体水平急剧下降,9～11月时血清EV71抗体阳性率处于最低水平,阳性率仅为10.00%,11月后婴幼儿血清抗体水平开始逐渐升高,-48月龄组幼儿血清EV71中和抗体阳性率可达66.67%,GMT为1：20.87。结果提示5月-3岁的婴幼儿是手足口病的易感人群。3.2011年上海地区轻、重症手足口病患儿EV71分离株全基因组特征分析：为探讨EV71基因序列的改变与临床结局的关系,对来自2011年重症与轻症手足口病患儿的各5株EV71分离株进行全基因组序列的RT-PCR扩增、测序及拼接,并与美国国立生物技术信息中心(NCBI)公布的EV71A、B、C基因型代表株进行核苷酸、氨基酸比对和系统进化分析。结果显示10株EV71分离株基因全长均为7406bp；轻、重症手足口病患儿EV71分离株高度同源,5’UTR和3’UTR区核苷酸同源性分别为96.7%99.0%、96.2%100.0%,P1区、P2区、P3区的核苷酸同源性/氨基酸同源性分别为95.9%～96.9%/99.1%～99.9%、95.4%～97.3%/96.5%～100.0%、95.1%97.4%/96.2%～99.7%；轻、重症患儿EV71分离株与C4基因亚型代表株有最高的核苷酸及氨基酸同源性,重症分离株与其在VP1-VP4区核苷酸/氨基酸同源性分别为97.0%～98.5%/99.3%～100.0%、97.7%～98.3%/99.6%～100.0%、97.3%～98.2%/99.2%～100.0%、96.0%～-99.5%/98.5%～100.0%,轻症分离株与其在VP1-VP4区核苷酸／氨基酸同源性分别为98.2%-98.5%/99.3%100.0%、97.7%-98.4%/100.0%、97.3%-98.0%/99.6%～100.0%、96.5%-99.0%/100.0%；在系统发生树上,2011年上海地区5例轻症和5例重症手足口病患儿EV71分离株均属C基因型的C4亚型。重症患儿EV71分离株在非编码区出现9个位点的明显碱基突变,在编码区重症分离株共发生22个位点的氨基酸突变,其中3例重症分离株在5个氨基酸位点VP1区(N282S).VP4区(T7A)、P2区(D85E)、3C区(V56I)和3D区(S37N)同时发生变异。4.不同介质表面EV71在不同气候中存活能力研究：为分析介质表面污染的EV71在不同温、湿度条件下的存活能力,以探讨外环境中EV71传播的潜在危险。将1×105TCID50病毒量的EV71均匀滴加在灭菌的塑料、木块和布片三种介质表面,置入模拟四种不同温、湿度气候条件的实验室人工气候箱中,一定时间后回收介质表面病毒,回收液接种Vero细胞,观察致细胞病变效应(CPE),每日监测不同气候条件下介质表面EV71存活情况。结果显示,介质表面污染的EV71存活时间受温、湿度气候条件影响,20℃、湿度80%的气候条件下病毒存活时间最长,模拟的四种气候条件中,温度低、湿度高的条件利于EV71的存活；在同一气候条件下,不同介质表面污染的EV71存活时间受介质材质影响,EV71在布片、木块天然材质中的存活能力强于合成材质塑料。5.看护点儿童手足口病防控措施的初探：2012年4月1日到6月30日,在上海市闵行区华漕镇全部16家看护点(1918名儿童)进行手足口病防控措施的初探,将所有看护点分为防控组和对照组,对照和防控组各8家,其中防控组687名儿童,对照组1231名儿童,在防控组采取包括严格晨检、缺勤登记、手及环境物表消毒等在内的防控措施,对照组仍进行其常规防控工作,防控实施3个月后比较两组手足口病的发病情况。结果显示,在3个月的防控实施期内,对照组发生7起手足口病疫情,其中2起为聚集性疫情,而防控组共发生3起,1起为聚集性疫情；4岁及以下年龄段的两组儿童手足口病的发病率差异明显,防控组3.70%(7/189)低于对照组5.28%(17/322),此外,对照组手足口病的发病时间集中在4、5月,而防控组集中在5、6月,说明防控措施在减少手足口病发病及聚集性疫情以及推迟手足口病发病时间方面都有一定作用。