地非三唑（Diphenyltriazol），简称DL111一IT，是一类人工合成的三氮唑化合物，化学名为3-（2-乙基苯基）-1 H-1，2，4三氮唑[3-（2-ethylphenyl）-5-（3-methoxypheyl）-1 H-1，2，4triazol]。最早由意大利学者Gallaiani报道，在多种动物上均具有良好的抗早孕作用。我研究室对该化合物用于终止早期妊娠进行了长期的研究，基本阐明了其抗早孕作用机制：1)DL111-IT可使黄体细胞分泌孕酮能力下降，并促使黄体细胞胞浆减少，胞核固缩、断裂并产生大量小片断DNA，最终产生诱导黄体凋亡的溶黄体作用；2)直接作用于孕体，特别是外胎盘；使蜕膜细胞受损，蜕膜组织变性、水肿及出血，孕体被排空或吸收；3)降低3β-HSD活性；增加20α-HSD活性；抑制PGs的代谢，增加PGF_2α含量，降低鸟氨酸脱羧酶的活性进而影响多胺（精脒与精胺）的生成，致使胚泡的发育终止。鉴于癌瘤组织和胚胎组织一样，都是生长旺盛的组织，而DL111-IT又具有上述作用特点，我们设想其对肿瘤组织也具有杀伤作用，本课题主要对DL111-IT的抗肿瘤作用及其作用机制的进行研究。 目的：研究DL111-IT在体内外的抗肿瘤作用，并探讨其作用机制。 方法：分别采用MTT法和台盼蓝活细胞拒染法评价DL111-IT体外抑制肿瘤细胞活性；采用小鼠皮下种植模型，观察DL111-IT对小鼠S180肉瘤和小鼠H22肝癌的实验治疗作用；采用裸小鼠皮下种植模型，观察DL111-IT对荷人卵巢癌HO-8910裸小鼠和荷人前列腺癌PC-3裸小鼠的治疗作用；应用流式细胞术检测不同浓度DL111-IT对HO-8910和PC-3细胞周期的影响；采用Western blotting的方法检测DL111-IT对HO-8910和PC-3细胞pRb、p-pRb、P53、cyclin D1、CDK4、MAT1和CDK7蛋白表达水平的影响；采用RT-PCR的方法检测DL111-IT对PC-3细胞pRb和Cyclin D1基因表达水平的影响。 结果： 1、采用MTT法对P388、PC-3、LNCaP、Hela、KB、HCT116、K562、CNE、RD、A549、Bel7402、HO-8910、HL60细胞等13种各类肿瘤细胞进行体外IC₅₀测定，结果表明，DL111-IT作用48小时对所试验肿瘤细胞均有较强的抑制增殖作用，其IC₅₀值均小于20μg／ml，最高抑制浓度均达到90％以上，其中对P388、HCT116、K562、Hela、PC3、LNCaP和Bel7402细胞的作用较强，其IC₅₀值均小于10μg／ml。结果还显示，DL111-IT在体外对多数细胞有效作用浓度范围较窄，随浓度的下降，抑制率迅速降低。DL111-IT对人卵巢癌HO-8910细胞作用24、48、72、96小时的IC₅₀及95％可信限分别为23.9（1 3.5一42.3）、15.1（12.5一18.4）、12.4（9.7一15.7）和9.1（6.3一13.2）拼glml，呈明显的时间依赖关系和剂量依赖关系。生长曲线实验结果表明，OLlll一IT 1.5林glm!和6.0林glml对人卵巢癌日O一89，0细胞的杀伤率分别为14.1%和23.4%，并呈明显的时间依赖关系，细胞生长饱和密度（Ns）分别为2.64士0.31和2.21士0.17个细胞/ml，与溶剂对照组的3.70士0.40个细胞/ml比较均有显著下降（p<0.05），OLlll一lT浓度为6.0林glml时细胞倍增时（下O）为44.8土3.，小时，与溶剂对照组的36.8士2.4小时比较有显著延长（p<0.05）。 2、对小鼠S，80肉瘤和小鼠日22肝癌的治疗作用试验结果表明，OLI，1一IT对该2种鼠源性肿瘤均有较好的实验治疗作用:连续给药10天后，阴性对照组5180的平均瘤重为1.52士0.579，DLlll一IT50mg/kg、25mglkg和12.5mg/kg组的平均瘤重分别为0 .67士0.359（P<0.01）、0.76士0.409（P<0.01）和1 .01士0.549（P>.05），与阴性对照组比较，平均瘤重均有不同程度的下降，抑瘤率分别为55.9%、50.0%和33.6%;阴性对照组H22的平均瘤重为2.00士0.499，DLlll一IT50mg/kg、25mg/kg和12.5mglkg组的平均瘤重分别为0.87士0.339、0.96士0.469和，.51士0.519，与阴性对照组比较，平均瘤重均有不同程度的显著下降（尸<0.05一0.01），抑瘤率分别为56.6%、52.0%和24.5%，oLlll一IT 50 mglkg和25 mg/kg组的抑瘤率大于40%。 3、对荷人卵巢癌日O一89，O裸小鼠的实验治疗作用试验结果显示，OL，，，一IT 50mg/kg、25 mg/kg和12.5 mg/kg组裸小鼠体重无明显影响（P>0.05）。与相应的溶剂对照组比较，OLll，一IT 50 mglkg和25 mglkg组移植瘤体积从第7天开始有显著减小（尸<0.05一0.001），0Llll一汀12.5 mglkg组植瘤体积从第10天开始也有所下降，但无统计学差异（P>0.05）。DLlll一IT 50 mg/kg组在给药后4、7、10、13、16天的相对肿瘤增殖率（T/C，%）分别为81.8%、44.7%、37.5%、37.6%和39.2%，从第7天开始相对肿瘤增殖率小于60%;OLlll一IT 25 mglkg组相应的相对肿瘤增殖率分别为95.4%、66.0%、60.9%、57.6%和58.8%，从给药后第13天开始相对肿瘤增殖率小于60%;DLlll一IT 12.5 mg/kg组相应的相对肿瘤增殖率分别为81.8%、83.0%、73.4%、65.9%和 79.4%，均大于60%。给药15天后剖杀取瘤块称重发现，OLlll一IT 50 mglkg、25mglkg和，2.5 mglkg组的人卵巢癌日O一8910移植瘤平均重量分别为0.37士0.，59（尸<0.001）、0.58士0.189（P<0.001）和0.87士0.259（P>.05），与阴性对照组的1.05士0.329比较有不同程度下降，三个剂量组相应的肿瘤抑制率分别为64.8%、44.8%和17.1%。4、?