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第一部分FGF21在前列腺癌中的表达水平及临床意义目的:探讨FGF21在前列腺癌中的表达情况及与前列腺癌病人临床病理特征的关系。方法:利用免疫组织化学方法分别检测FGF21在42例前列腺癌病人组织及24例前列腺增生病人组织中的表达情况。利用统计学检验分析前列腺癌病人组织中的FGF21的表达水平与前列腺癌病人临床病理特征的相关性。利用q-PCR和Western blotting分别检测FGF21在前列腺正常上皮细胞(RWPE-1)和前列腺癌细胞株(LNCaP、PC3、DU145和22RV1)中m RNA和蛋白表达水平。结果:免疫组织化学染色实验结果显示FGF21在前列腺癌病人组织和前列腺增生病人组织标本中的阳性率分别是38.1%(16例/42例)和70.8%(17/24例),差异表达具有统计学意义(p<0.05)。FGF21蛋白表达与前列腺癌病人临床病理特征分析结果显示FGF21的表达与前列腺癌的临床病理分期和Gleason评分密切相关(p<0.05);而与年龄、PSA及是否发生淋巴结转移均没有统计学意义(p>0.05)。q-PCR和Western blotting结果显示与前列腺正常上皮细胞RWPE-1相比,FGF21的表达水平在前列腺癌细胞LNCaP、DU145、PC3和22RV1细胞中表达均明显降低,具有统计学意义(p<0.01)。结论:FGF21在前列腺癌病人组织和癌细胞中低表达,并且与前列腺癌病人临床病理特征密切相关。第二部分FGF21在高糖状态下对前列腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响目的:探讨FGF21在高糖状态下对前列腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:提取pFGF21和对照pN1质粒,在不同糖浓度下分别转染前列腺癌LNCaP细胞。用5m M葡萄糖浓度模拟细胞生长的正常糖浓度状态,作为Control组,用25m M葡萄糖浓度模拟细胞生长的高糖浓度状态,作为HG组。实验被分为以下四组(Control-pN1,Control-pFGF21,HG-pN1,HG-pFGF21)。利用CCK-8和克隆形成实验检测FGF21对前列腺癌LNCaP细胞增殖能力的影响。利用流式细胞仪技术分析FGF21对前列腺癌LNCaP细胞凋亡能力的影响。利用划痕实验和Transwell侵袭实验检测FGF21对前列腺癌LNCaP细胞迁移和侵袭能力的影响。利用裸鼠皮下成瘤实验检测FGF21对前列腺癌LNCaP细胞体内成瘤能力的影响,并利用统计学检验分析对裸鼠的体重、肿瘤体积和肿瘤重量的影响。利用q-PCR和Western blotting分别检测前列腺癌LNCaP细胞中FGF21、Ki67和BCL2 m RNA和蛋白表达水平变化。结果:pFGF21和对照pN1质粒成功提取,并成功转染前列腺癌LNCaP细胞。CCK-8和克隆形成实验显示高糖促进前列腺癌细胞的增殖,FGF21可以改善高糖对前列腺癌细胞增殖的影响,抑制前列腺癌细胞的增殖。流式细胞仪技术分析结果显示高糖抑制前列腺癌细胞的凋亡,FGF21可以改善高糖对前列腺癌细胞凋亡的影响,促进前列腺癌细胞的凋亡。划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示高糖促进前列腺癌细胞的迁移和侵袭,FGF21可以改善高糖对前列腺癌细胞迁移和侵袭的影响,抑制前列腺癌细胞的迁移和侵袭。皮下裸鼠成瘤实验结果显示四组之间裸鼠的体重没有差异,pFGF21对裸鼠没有毒性;与HG-pN1组相比,HG-pFGF21组瘤子体积和瘤子重量显著减少,具有统计学意义(p<0.01)。q-PCR和Western blotting结果均显示与HG-pN1组相比,FGF21过表达时,HG-pFGF21组Ki67和BCL2表达均降低(p<0.05)。结论:在高糖状态下FGF21抑制前列腺癌LNCaP细胞的增殖、迁移和侵袭,促进前列腺癌LNCaP细胞的凋亡。第三部分FGF21在高糖状态下对前列腺癌细胞自噬的影响及其机制目的:探讨FGF21在高糖状态下对前列腺癌细胞自噬的影响及其机制。方法:利用细胞免疫荧光实验和透射电镜技术检测FGF21对前列腺癌LNCaP细胞自噬小体生成的影响。利用q-PCR和Western blotting分别检测前列腺癌LNCaP细胞中自噬指标LC3B和P62 m RNA和蛋白表达水平变化。在高糖状态下用m TOR的激活剂MHY1485(2u M,6h)处理前列腺癌LNCaP细胞来探讨FGF21影响前列腺癌细胞自噬的机制通路,Western blotting检测Akt-m TOR通路相关蛋白的表达水平变化。结果:细胞免疫荧光实验和透射电镜技术结果显示高糖抑制前列腺癌LNCaP细胞自噬小体的生成,FGF21可以改善高糖对前列腺癌细胞自噬小体生成的影响,促进自噬小体的生成。q-PCR和Western blotting结果均显示与HG-pN1组相比,FGF21过表达时,HG-pFGF21组LC3B表达增高(p<0.01),P62表达降低(p<0.05)。Western blotting结果显示与HG-pN1组相比,HG-pFGF21组Akt-m TOR通路相关蛋白表达水平显著降低(p<0.05)。当在高糖状态下加入MHY1485处理因素后,Akt-m TOR通路相关蛋白表达水平显著增高(P<0.01),FGF21在高糖状态下对LNCaP细胞的影响均减弱,并且具有显著性意义(p<0.01)。结论:FGF21在高糖状态下通过抑制Akt-mTOR通路促进前列腺癌细胞的自噬。