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本文以蛹虫草菌[Cordyceps Militarism(L.Fr)Link]为实验材料,系统而深入地研究了蛹虫草液体发酵的培养基及培养条件的优化,并在所得的优化培养基及培养条件下进行扩大培养。然后对菌丝体和发酵液中的多糖,菌丝体中的虫草素分别进行了含量测定,并对它们的提取纯化工艺进行了研究,结果如下: 1.对接种量(%)、发酵温度(℃)、初始pH值、发酵周期(h)进行单因素试验分析。在此基础上,对以上四因素进行四因素三水平的正交实验分析。确定了最佳发酵条件为:接种量10%,发酵温度27℃,初始pH7,发酵周期96h。 2.以菌丝体干重及粗多糖重量为指标,对五种碳源进行多重比较。结果显示:葡萄糖、麦芽糖、白糖、蔗糖、可溶性淀粉之间在0.05水平上均存在显著差异(P<0.05)。选用葡萄糖为最佳碳源,浓度应控制在4.0-5.0g/L之间。 3.以菌丝体干重及粗多糖重量为指标,对五种氮源进行多重比较。结果显示:酵母膏、蛋白胨、硝酸钠、氯化铵、牛肉膏之间在0.05水平上均存在显著差异(P<0.05)。选用蛋白胨为最佳氮源,最适氮源浓度为2.0g/L。 4.以葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、FeSO4为原料,进行四因素三水平的正交试验分析。结果显示:对菌丝体得率影响最大的为葡萄糖,其次分别为蛋白胨、KH2PO4和FeSO4。最佳发酵培养条件为葡萄糖5g/100ml、蛋白胨0.2g/100ml、FeSO4 0.001g/100ml、KH2PO4 0.05g/100ml。 5.从最优化培养基条件下进行扩大培养,对菌丝体及发酵液中粗多糖进行提取、分离、纯化,通过Sevage法除蛋白及葡聚糖凝胶柱层析,得到精多糖。结果为:菌丝体精多糖得率为1.7228g/100g干菌丝体;发酵液精多糖得率为0.1007g/L发酵液。通过标准曲线测得菌丝体中精多糖的含量为70.30%,发酵液中精多糖的含量为66.90%。 6.从最优化培养基条件下进行扩大培养,对其进行菌丝体中虫草素的提取、分离、纯化,通过阴离子交换树脂得到虫草素结晶,得率为53.88mg/100g干菌丝体。对其进行含量测定,得虫草素结晶中虫草素的含量为88.9%。