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玉米是重要的粮食作物和工业原料,其中关于玉米的淀粉代谢的研究是科学家研究的热点之一。玉米淀粉的代谢调控是由多个酶协调作用,共同调节完成的复杂的生物学过程。近期研究结果表明,在玉米淀粉代谢过程中,多种淀粉代谢相关的酶形成多酶复合物通过相互作用的形式来参与到调节淀粉的代谢的过程中。这种复合物的相互作用促进了糖异生,糖酵解,淀粉合成等多种不同代谢途径在空间位置关系上的拉近,可能预示着几种代谢途径存在着共同的代谢底物,糖酵解,淀粉代谢途径可能通过几种蛋白的相互作用来促进淀粉的代谢。近年来的研究表明:ADP葡萄糖焦磷酸化酶小亚基AGPase-bt2,是淀粉合成代谢中的关键酶,甘油醛-3-磷酸脱氢酶GPN1、FBA、磷酸丙糖异构酶TPI是糖酵解过程中的关键酶。本试验总结了实验室人员前期研究进展,结合相关文献研究报道,选取了玉米淀粉合成中的关键酶ADP葡萄糖焦磷酸化酶小亚基AGPase-bt2,以及糖酵解过程中的关键酶甘油醛-3-磷酸脱氢酶GPN1、果糖-二磷酸醛缩酶FBA、磷酸丙糖异构酶TPI作为实验对象,在实验室前期已经利用酵母双杂交技术对几种酶的相互作用进行了酵母体内的验证的工作基础上,利用双分子荧光互补技术(BIFC)在大叶烟草体内对几种酶进行了蛋白互作的验证,力求真实还原三对蛋白在植物体内的互作关系。实验结果表明:在成功构建326-CYCHA-AGPase-bt2、326-CYNEE-GPN1、326-CYNEE-FBA、326-CYNEE-TPI四个荧光表达载体,并共转化农杆菌,利用瞬时转化技术将荧光表达载体转入烟草叶肉细胞,利用激光共聚焦显微镜观察三对蛋白相互互作的情况。观察结果显示三对蛋白在显微镜下均产生明显的黄色荧光信号,且发生互作关系的位置在叶绿体中,表明在烟草体内三对蛋白存在着相互作用关系。