目的:IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)是目前世界上最常见的慢性进行性的原发性肾小球疾病。其主要病理特征是IgA免疫复合物在系膜区沉积,导致系膜细胞的增殖和细胞外基质的沉积,引起一系列临床及病理生理改变,是导致终末期肾病(ESRD)的主要原因之一。随着肾脏活组织穿刺技术的逐渐推广,儿童IgA肾病的诊断率也在逐年提高,但目前尚无特效的治疗方法,临床仍以控制症状及经验性治疗为主。以往认为IgA肾病是一种良性疾病,预后好。但长期随访结果发现约20%～50%的成人患者最终发展至肾功能衰竭[1]。儿童患者预后较成人好,但起病5年、10年、15年后分别有5%、6%及11%的患儿产生慢性肾功能衰竭。因此如何积极防治IgA肾病在我国肾脏病研究中具有举足轻重的地位。大量的研究表明肾素-血管紧张素系统(Renin-Angiotensin System,RAS),尤其是血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,ATⅡ),是慢性肾脏疾病进行性发展的重要影响因素。RAS在IgA肾病的发病中也有重要作用。应用RAS阻滞剂可有效改善IgA肾病的临床症状,血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(AngiotensinⅡreceptor blockers,ARB)是肾素-血管紧张素系统(RAS)抑制剂,近年来被有效地用于IgA肾病的治疗。氯沙坦是特异性血管紧张素ⅡI型受体拮抗剂,对于IgA肾病患者,尤其是合并蛋白尿或高血压的患者,氯沙坦有利于保护肾功能延缓肾衰竭的发生。研究表明,p38MAPK信号转导通路可被血管紧张素Ⅱ等炎性因子激活,在炎症反应中发挥着重要的作用而且通过多种途径促进肾脏纤维化。而血管紧张素ⅡI型受体拮抗剂的肾脏保护作用是否通过阻断p38MAPK转导通路改善肾脏纤维化、延缓肾小球硬化的进程目前尚无明确定论。我们以IgA肾病大鼠为模型,观察氯沙坦对IgA肾病大鼠肾脏组织中p38MAPK表达情况的影响,初步探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂的肾脏保护作用机制及治疗IgA肾病的作用机制。方法:Wistar雄性大鼠,由河北医科大学实验动物中心提供(试验动物质量合格证编号:702022)。按汤颖等[2]建立的方法,选取体重100~120g雄性Wistar大鼠30只按随机数字表随机分成对照组(n=10);IgA肾病组(n=10);氯沙坦(losartan,杭州默沙东制药公司提供)组(n=10)。IgA肾病组和氯沙坦组大鼠以牛血清白蛋白400mg·kg-1·d-1隔天灌胃,持续6周;皮下注射蓖麻油0.5mL+四氯化碳0.1mL,每周1次,持续9周;分别于第6、8周以脂多糖0.05mg尾静脉注射,直至10周末。实验期间对照组动物自由进食饮水,不给予任何药物干预。建模后将IgA肾病组大鼠肾皮质组织切成3μm的冰冻切片,采用兔抗大鼠IgA和FITC标记羊抗兔IgG间接免疫荧光染色,荧光显微镜下观察到肾小球系膜区IgA沉积阳性,PAS和Masson染色显示系膜细胞增生和系膜基质的沉积表明造模成功。模型建成后,氯沙坦组大鼠给予氯沙坦20mg·kg-1·d-1灌胃四周,对照组给予等量蒸馏水灌胃四周,总实验周期为14周。各组大鼠处死前用代谢笼收集大鼠24小时尿液,测定24小时尿蛋白。股动脉放血分离血清测定肾功能。取部分肾组织置于4%多聚甲醛固定用于光镜观察及免疫组化检测;部分肾皮质组织用于提取肾组织总RNA和肾组织总蛋白。免疫组化检测肾皮质磷酸化p38蛋白激酶(p-p38MAPK)的表达特征。Western Blot检测肾脏磷酸化和非磷酸化p38MAPK的表达水平。RT-PCR检测大鼠肾组织中p38MAPK的mRNA含量。所有实验数据用均数±标准差(x±s)表示,用SPSS 11.5统计软件进行分析。组间差异用单因素方差分析(one way-ANOVA),有显著差异者用Newman-Kuels q检验进行两两比较,以P<0.05为有统计学意义。结果1生化指标显示,IgA肾病组大鼠24小时尿蛋白(24hUpro)、血尿素氮(BUN)和血肌酐(SCr)明显高于对照组(P<0.01),血白蛋白明显低于对照组(P<0.01);氯沙坦组与IgA肾病组相比各指标均有不同程度改善(P<0.05)。2免疫细胞化学结果显示,p-p38MAPK在对照组大鼠肾组织中有微弱表达,而在IgA肾病组的相对含量显著增加,与对照组相比有显著性差异(P<0.01);氯沙坦组蛋白表达较IgA肾病组降低,有显著性差异(P<0.01)。3 Western印迹结果显示,p38MAPK蛋白在IgA肾病组和对照组的表达无明显差异(P>0.05)。与对照组相比,IgA肾病组大鼠肾组织中p-p38MAPK的表达水平明显升高(P<0.01);氯沙坦组大鼠p-p38MAPK的蛋白表达较IgA肾病组明显降低(P<0.01)。4 RT-PCR结果显示,p38MAPK mRNA在对照组大鼠肾组织中有少量表达,IgA肾病组大鼠肾组织该蛋白表达明显上调(P<0.01);氯沙坦组大鼠p38MAPK mRNA表达显著下调(P<0.01)。结论1氯沙坦能有效的降低IgA肾病大鼠的24小时尿蛋白,并对IgA肾病大鼠肾功能改善有一定的作用。2在IgA肾病大鼠肾组织内p38MAPK被激活,p38MAPK信号转导途径的激活在IgA肾病的发生发展过程中可能发挥着重要的作用。3氯沙坦能够明显抑制IgA肾病大鼠肾组织p38MAPK信号蛋白的表达。4氯沙坦的肾脏保护作用可能是通过抑制p38MAPK的表达改善肾脏纤维化、延缓肾小球硬化来完成的。5 p38MAPK信号转导通路抑制剂可能成为临床治疗IgA肾病的新途径。