研究目的： 克隆红曲霉和土曲霉洛伐他汀合成酶调控基因lovE和mkH并进行比对分析；原核表达并纯化洛伐他汀合成转录因子lovE蛋白；构建lovE基因的真核表达载体。 研究方法： 根据genebank已知的土曲霉和红曲霉洛伐他汀合成酶基因序列设计引物，以土曲霉和红曲霉基因组DNA为模板PCR扩增lovE和mkH基因并克隆到pMD19T-simple载体。利用DNAMAN等软件以及互联网资源对lovE和mkH测序结果与其编码的氨基酸序列进行分析比对。根据genebank已知的土曲霉洛伐他汀合成酶基因序列另行设计引物，以土曲霉基因组DNA为模板PCR扩增lovE基因并定向克隆到pET-21b原核表达载体。IPTG诱导lovE-His融合蛋白表达，应用Ni-NTA His标签蛋白纯化树脂亲和层析纯化融合蛋白。根据genebank已知的土曲霉洛伐他汀合成酶基因序列设计两对引物，以土曲霉基因组DNA为模板PCR分别扩增lovE和lovElong基因并以两对插入位点定向克隆到pBC–hygro真核表达载体。 研究结果： 分别扩增得到1512bp和1464bp的目的片段lovE和mkH；成功构建原核重组表达载体pET–lovE，表达出约58KDa的融合蛋白lovE-His并纯化至电泳纯；成功构建真核重组表达载体pBC-lovE和pBC-lovElong。 研究结论： lovE和mkH同源性很高，并与genebank中相关已知序列基本相同，是洛伐他汀生物合成酶调控基因，且其表达产物为GAL4类转录因子。构建了lovE-His融合蛋白原核重组表达载体，并高效表达和纯化了该融合蛋白，为进一步深入了解该类转录因子生物学功能和作用机理奠定了实验基础。构建2个lovE蛋白的真核重组表达载体，为研究lovE基因的真核转化体系提供了实验基础。