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目的构建肿瘤/睾丸抗原GAGE7基因片断的真核表达载体,并转入酿酒酵母菌中诱导表达及纯化,获得纯化蛋白,为该蛋白进一步的免疫学研究奠定基础;此外,以此蛋白为包被抗原,通过间接ELISA法对肺癌患者血清中GAGE7抗体进行检测,以期为GAGE可能作为恶性肿瘤血清学诊断的理想标记提供实验依据。方法用PCR法扩增肿瘤/睾丸抗原GAGE7的基因片断,将目的基因插入真核表达载体PYES2/NTA的His结合蛋白基因下游,转化EcoliDH5α菌,通过氨苄青霉素筛选、琼脂糖电泳鉴定、内切酶鉴定及DNA测序筛选出正确的重组子,并将其转化野生型酿酒酵母菌DBY746。采用2%半乳糖（IPTG）对工程菌进行诱导表达,分别于0、6、12、18、24、36小时收集菌体,提取总蛋白SDS-PAGE电泳及western-blot分析鉴定,以找出最适诱导时间。按优化条件大量诱导的工程菌裂解后,上清液过HIS-selectTMresin column亲和层析柱,获取纯化的His-GAGE7融合蛋白。同时,本实验选取肺癌为代表,并以此纯化蛋白为包被抗原,通过间接ELISA法检测临床肺癌患者血清中相应抗体,同时以健康人为阴性对照,最后结果进行统计学分析。结果1、GAGE7基因的PCR扩增产物经过酶切处理后,与真核表达载体PYES2/NTA进行链接,并经过电泳、酶切及DNA测序鉴定表明:目的基因被成功插入载体质粒的多克隆位点,所插入目的基因序列读码框完全正确。说明目的基因正确克隆到了表达载体上;2、鉴定正确的重组子经转化大肠杆菌扩增后,再转化酿酒酵母菌中,以IPTG诱导表达,提取总蛋白经SDS-PAGE电泳和western blot鉴定,结果表明:成功诱导表达出His-GAGE7融合蛋白。工程菌在30℃诱导的最初18个小时内,目的蛋白表达量会随着诱导时间的延长而增加,但超过18个小时,则会明显下降。按时间优化条件诱导的工程菌裂解后,上清液过HIS-selectTM-resin column亲和层析柱,可纯化得较高浓度的可溶性His-GAGE7融合蛋白,其分子量约15KD;3、以此纯化的蛋白为包被抗原通过间接ELISA法检测肺癌患者血清中GAGE7抗体,并以健康者血清作阴性对照,经统计分析结果表明:1).各型肺癌与健康者比较均P<0.01（t检验）,有统计学意义,各型肺癌组AD450值明显高于健康对照组;2).Ⅰ～Ⅱ期肺癌与Ⅲ～Ⅳ期肺癌比较,Ⅲ～Ⅳ期肺癌组的AD450值显著高于Ⅰ～Ⅱ期肺癌组P<0.01,有统计学意义（t检验）;3).各型肺癌之间P>0.5（X2检验）,无统计学意义。结论1、成功构建GAGE7基因的重组真核表达载体PYES2/NTA-GAGE7;经转化酿酒酵母菌DBY746后,以IPTG诱导表达,并纯化出较高浓度的重组蛋白,为其进一步的免疫学研究奠定了基础;2.纯化的GAGE7蛋白具有较好的抗原性,能与人肺癌患者血清中抗GAGE蛋白抗体发生反应,这一结果表明GAGE基因可望作为恶性肿瘤血清学诊断的理想标记。