【摘 要】
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在体外，蛋白质交联通过三个连续的步骤完成：1．蛋白质构象的改变；2．链间二硫键的形成；3．形成链间异肽交联。为进一步证实这一假说并研究蛋白质二硫键异构酶分子间交联与其酶活性的之间的相互关系，本文对蛋白质二硫键异构酶分子进行了两处点突变，分别将位于其两个活性中心内的半胱氨酸（Cys36和Cys381）突变为丝氨酸。在野生型PDI蛋白纯化物中，经SDS-PAGE，除在55kDa处可见有一条主带外，还出
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在体外，蛋白质交联通过三个连续的步骤完成：1．蛋白质构象的改变；2．链间二硫键的形成；3．形成链间异肽交联。为进一步证实这一假说并研究蛋白质二硫键异构酶分子间交联与其酶活性的之间的相互关系，本文对蛋白质二硫键异构酶分子进行了两处点突变，分别将位于其两个活性中心内的半胱氨酸（Cys36和Cys381）突变为丝氨酸。在野生型PDI蛋白纯化物中，经SDS-PAGE，除在55kDa处可见有一条主带外，还出现了二聚体条带。而在同样条件下，在PDI突变体（Cys36/381Ser）蛋白纯化物中完全没有形成二聚体。热变性结果显示，野生型PDI有很强的形成二聚体的倾向，而在同样条件下，PDI突变体（Cys36/381Ser）只略微形成寡聚体。结果表明，点突变（Cys36/381Ser）使PDI的酶活性丧失，从而导致PDI分子间并联能力明显下降。实验结果再次证实形成链间二硫键对于促进异肽交联起重要作用这一观点。到目前为止，还没有得到PDI的晶体。瓶颈问题之一在PDI分子很容易形成交联，这种异质性使PDI非常难于结晶。突变体Cys36/381Ser在纯化过程中表现出很好的同质性，这可能使它很有希望成为用于结晶的蛋白。本文还对PDI分子的二级结构进行了预测，对15种PDI序列进行了序列比对和进化分析，以期望能对PDI的结构和功能有更进一步的理解。
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