温郁金(Curcuma wenyujin Y.H.Chen et C.Ling)为姜科(Zingiberaceae)姜黄属(Curcuma L.)草本植物,其药用价值很高,被广泛应用于中医临床治疗上。海南省于1997年开始引进并种植,随着种植面积不断扩大,加上连作和栽培管理不完善等因素,造成温郁金病害发生日趋严重,对该中药材的产量和质量造成较大影响,已成为严重制约温郁金产业可持续发展的重要因素,而温郁金茎点霉叶枯病是造成温郁金减产的主要病害之一。本文首次对温郁金茎点霉叶枯病进行了系统性研究,包括病原鉴定、生物学特性(不同培养条件对菌丝生长的影响、室内药剂筛选和病原菌粗毒素产生条件优化)及其部分真菌病毒的鉴定等,研究结果如下:温郁金茎点霉叶枯病主要危害叶片。发病初期,下层叶片产生黄白色圆形或不规则形的小斑点,病斑周围有明显黄色晕圈,随后病斑沿着叶脉延伸,联合成大的不规则形浅褐色病斑,并向上部叶片扩展,后期病斑会扩展至全叶,引起叶片干枯,严重时造成植株死亡。在高温高湿的环境条件下,病部产生小黑点。病原菌经分离培养、单孢纯化、致病性测定、形态学鉴定及多基因(ITS,TUB2和LSU)系统发育分析,结果表明引起温郁金茎点霉叶枯病的病原菌为Phoma matteccuciiola。对温郁金茎点霉叶枯病菌的生物学特性进行研究,结果表明不同培养条件对菌丝生长的影响存在差异,PDA培养基为病原菌WYJ01和WYJ03的菌丝生长最适培养基,最适宜的温度分别为28℃和30～32℃,菌丝生长的最适pH均为5.0;持续光照更有利于菌丝生长,最适碳源均为乳糖;最适氮源均为硝酸钠。选用12种药剂进行室内毒力测定,结果表明,苯醚甲环唑对病原菌WYJ01菌丝的毒力最大,EC50为0.0323 μg·mL-1氟硅唑对病原菌WYJ03菌丝的抑制作用最强,EC50为0.0242 μg·mL-1。对温郁金茎点霉叶枯病菌粗毒素的产生条件进行优化。试验结果表明,不同产毒条件下病原菌WYJ01和WYJ03的粗毒素产生能力存在明显差异,Richards培养液为粗毒素产生的最优培养基,静止培养6 d最利于粗毒素在体外的产生,粗毒素产生的最佳温度分别为28℃和30℃。与其他5个温郁金茎点霉叶枯病菌株相比,病原菌WYJ01的菌落形态较异常,边缘有扇形角变区,生长缓慢且易产生大量厚垣孢子,菌落黑色。提取菌株WYJ0l的总RNA,构建cDNA文库进行高通量测序,发现WYJ01中含有7种不同病毒信息。将其中的一个 dsRNA Phoma matteucciicola partitivirus 1 命名为 PmPVl,并对该病毒(PmPVl)进行cDNA克隆,获得基因组全长。其基因组含有两个dsRNA片段,并且各自具有一个开放性阅读框(ORF),其中,较大的片段dsRNA-1(1664 bp)编码依赖RNA的RNA聚合酶(RdRp)结构域。较小的片段dsRNA-2(1383 bp)编码一个未知功能的蛋白。病毒粒体呈球形,直径大小约为30 nm。基于病毒的RdRp构建系统发育树,结果表明 PmPVl 与 Colletotrichum acutatum RNA virus 1 和Ustilaginoidea virens partitivirus 2 聚为一支,是双分体病毒科(Partitiviridae)的一个新成员。以上研究成果为温郁金病害的防治提供了相关的理论依据,对海南省温郁金产业的发展具有重要意义。