邻苯二甲酸二乙基已酯(DEHP)对中国林蛙幼体生长发育和代谢的影响

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邻苯二甲酸酯(phthalatic esters, PAEs)作为增塑剂和软化剂被广泛应用于涂料、化妆品等化工制品的制造中,可释放到环境中并对生物群落形成污染。邻苯二甲酸二乙基已酯(di-2-ethylhexyl phthalate, DEHP)是PAEs的一种,对多种动物的生长发育具有明显的氧化损伤、繁殖毒性、免疫毒性、基因毒性以及致癌性。两栖动物的繁殖和幼体发育过程在水域中完成,对水的污染物较为敏感,因此蝌蚪可为水域物毒性实验的理想材料。本实验以中国林蛙(Rana chensinensis)幼体为材料,研究DEHP对蝌蚪的生长、发育和性别分化的影响,并通过对甲状腺结构观察以及抗氧化酶活性等指标的检测,探讨DEHP对蝌蚪内分泌的干扰以及氧化应激的机制。实验将27期蝌蚪分别暴露于10-6、10-5、10-4mol·L-1DEHP水溶液持续至31、37、42、46期时,检测并统计存活率、畸形、体长、体重、肝指数、肠指数以及发育时间等指标,取甲状腺和变态后幼蛙性腺做组织切片,统计性别比例。获37、46期蝌蚪肝脏,检测肝组织中抗氧化酶活性,评价DEHP暴露至不同时期对林蛙肝脏的氧化应激。结果及结论如下:1.在10-4mol·L-1DEHP组的慢性暴露实验中,蝌蚪从27期至完全变态后的存活率为74%,整个暴露实验中死亡率与暴露浓度之间呈剂量-效应依赖关系,个体中出现尾部扭曲的畸形。表明DEHP具有慢性毒性,可导致发育畸形。2.在慢性暴露至蝌蚪31期时,蝌蚪的全长、体重、肝指数和肠指数在各浓度组都无显著差异。暴露持续至37、42、46期时,肠指数和全长在10-4mol·L-1DEHP组均显著降低,肝指数在10-4mol·L-1DEHP组显著升高,在其余浓度组无显著差异。在暴露持续至蝌蚪37、42、46期时,蝌蚪的体重在各浓度组均无显著差异,但发育时间随暴露浓度增加显著延长。表明DEHP对林蛙蝌蚪的生长发育有不同程度的影响,能延缓发育时间,对肝脏发育有明显影响。3.对甲状腺组织切片观察,在10-4mol·L-1DEHP组的甲状腺滤泡腔中胶质减少,个别出现空泡化,甲状腺滤泡的变形率也显著增加。表明DEHP对甲状腺的发育有一定影响。性别比例检测结果表明,在10-5、10-4mol·L-1组雌性比例显著增加,表明DEHP可影响性腺分化,表现出雌激素效应。4.在慢性暴露持续至蝌蚪37期时,蝌蚪肝组织的SOD和CAT活性增高,表现为DEHP对于抗氧化酶的激活效应;在蝌蚪46期,肝中SOD和CAT活性又相对降低,表现为抑制效应;抗O2-的活力和抑制·OH自由基能力的检测结果也呈现类似的变化,进一步验证SOD和CAT活性变化的效应。表明随着暴露时间增加,抗氧化相关指标表现为先激活后抑制的趋势。DEHP暴露后蝌蚪肝组织的NO的含量增加,NOS活力的增高,但不与DEHP呈剂量-效应变化。表明DEHP引起NOS介导的信号分子NO的增加可降低活性氧,DEHP表现为具有抑制抗氧化应激的效应。
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