【摘 要】
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本研究从玉米大斑病菌基因组数据库中克隆得到了1个MAPK激酶基因STK2,利用酵母异源互补技术初步明确了其功能,发现该基因能互补酿酒酵母FUS3/KSS1在丝状生长、侵入生长及子囊孢
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本研究从玉米大斑病菌基因组数据库中克隆得到了1个MAPK激酶基因STK2,利用酵母异源互补技术初步明确了其功能,发现该基因能互补酿酒酵母FUS3/KSS1在丝状生长、侵入生长及子囊孢子形成等方面的功能;克隆得到了1个磷酸酶基因StMSG5,利用基因敲除技术对该基因功能进行分析,发现该基因对病菌生长发育及侵入过程具有负调控作用。主要研究结果如下:1、克隆的玉米大斑病菌STK2基因cDNA全长为1092bp、编码363个氨基酸。生物信息学分析表明,该基因与丝状真菌的FUS3/KSS1-like基因有较高的同源性。2、构建了酿酒酵母表达载体pVT102U-STK2,将该重组质粒转化酿酒酵母fus3/kss1基因缺失突变体,通过氨基酸合成缺陷培养基的筛选、PCR及RT-PCR的验证获得了STK2基因互补转化子(互补酿酒酵母fus3/kss1基因缺失突变体)。3、通过对STK2基因互补转化子与野生型菌株的生长发育特征比较,发现二者在假菌丝形成、侵入生长、子囊孢子发育等方面具有类似的特征,表明玉米大斑病菌STK2基因与酿酒酵母FUS3、KSS1基因具有类似的功能。4、搜索JGI网站(http://genome.jgi-psf.org)上公布的玉米大斑病菌基因组序列,得到了作用于STK2基因的磷酸酶基因StMSG5序列。该基因DNA全长为1521bp,cDNA全长1464bp,含有1个内含子,其长度为57bp。生物信息学分析表明,该基因属于MSG5-like基因,可能具有使FUS3/KSS1-like激酶去磷酸化的作用。5、以pBS-pUC质粒为基本骨架,构建了StMSG5的敲除载体,经PEG3350介导的原生质体转化,用50μg/mL的潮霉素B筛选、特异引物PCR和RT-PCR验证,得到了1株StMSG5基因敲除突变体ΔStMSG5。6、通过对StMSG5基因敲除突变体进行分析,发现分生孢子的产量较野生型菌株明显增多,附着胞的穿透能力增强,但菌落和菌丝生长没有明显的形态变化。说明StMSG5对病菌分生孢子的产量、附着胞的穿透能力具有负调控作用,但不调控菌落生长和发育。
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