鸡新城疫(Lasota株)、鸡传染性法氏囊病(NF8株)二联活疫苗的研制

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按照《中华人民共和国兽用生物制品规程(2000年版)》(以下简称规程)中的《鸡新城疫低毒力活疫苗制造及检验规程》及OIE的标准方法对从中国兽药监察所购买的新城疫病毒(NDV)Lasota株冻干种毒进行种毒鉴定,包括病毒的SPF鸡胚复壮及传代,病毒的平均死亡时间(MDT)和脑内致病指数(ICPI),对鸡胚的毒力测定,病毒含量的测定,安全性,纯净性检验,特异性检验以及免疫原性的测定,结果表明所采用的Lasota毒株是稳定的,符合ND低毒力活疫苗株的要求。按照规程中的《鸡传染性法氏囊病中等毒力活疫苗制造及检验规程》及OIE的标准方法对来自扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室的传染性法氏病毒(IBDV)NF8株进行种毒鉴定,包括毒种的病毒含量的测定、对鸡胚及雏鸡的毒力测定、对雏鸡的安全性试验、毒力稳定性试验、抗体产生期试验、免疫原性的测定、免疫抑制安全性试验、特异性检验以及纯净性检验。结果表明所采用的IBDV.NF8株毒力稳定、无免疫抑制作用、能突破母源抗体干扰、免疫原性好,是合适的生产鸡传染性法氏囊病中等毒力疫苗的毒种。采用经鉴定合格的鸡新城疫低毒力弱毒株(Lasota株)和鸡传染性法氏囊病中等毒力株(NF8株),分别接种SPF鸡胚,收获感染Lasota尿囊液和NF8绒毛尿囊膜及鸡胚组织磨制混合液,进行无菌检验和效价测定,合格后以1:1比例混合,加稳定剂后,经冷冻真空干燥制成一批鸡新城疫(Lasota株)和鸡传染性法氏囊病(NF8株)二联活疫苗(以下简称二联苗)。检测该批制品,物理形状、无菌检验、外源病毒检验、支原体检验为合格。其新城疫病毒含量分别为107.0EID50/羽份,法氏囊病毒含量分别为104.50ELD50/羽份。用10个使用剂量及1个使用剂量的二联苗接种SPF雏鸡,同时将不免疫的SPF鸡与免疫鸡关在同一笼内一起饲养21天,进行安全性试验及免疫扩散试验。对于10个使用剂量组,观察14天,全部健活,剖检10个使用剂量组和对照组部分鸡,无新城疫及传染性法氏囊病特异性病理变化,证明该批疫苗安全性良好;分别于免疫后1周、2周、3周采血测NDV的血凝抑制(HI)抗体和IBDV的中和(SN)抗体,于3周时对免疫鸡和非免疫鸡分别攻击ND、IBD强毒,观察免疫鸡和未免疫鸡的保护率。结果表明:当非免疫SPF鸡与二联苗免疫过的SPF雏鸡同居一定的时间后,能使非免鸡感染并产生相应的NDV HI抗体和IBDV SN抗体。分别攻击ND强毒和IBD强毒后不会引起免疫鸡及同笼饲养未免疫鸡产生ND发病症状及法氏囊病变;攻毒后保护指数皆为100%,完全能起到免疫及扩散保护作用。用ND病毒含量分别为104EID50、5000EID50、103EID50的二联苗免疫SPF雏鸡后,攻击ND强毒;用IBD病毒含量为300ELD50、200ELD50、100ELD50二联苗免疫SPF雏鸡后,攻击IDB强毒进行二联苗的最小免疫量试验。结果表明,二联苗的最小免疫量ND为5000 EID50,IBD为200ELD50。用二联苗、鸡新城疫(Lasota株)单苗和鸡传染性法氏囊病(NF8株)单苗分组免疫7日龄SPF雏鸡及有母源抗体的雏鸡。对SPF雏鸡免疫后1周、2周、3周分别采血测抗体并在3周后分别攻击ND和IBD强毒。对有母源抗体的雏鸡实验分两部分进行,第一部分(一免组):一免后1周、2周、3周分别采血测抗体并在3周后分别攻击ND和IBD强毒;第二部分(二免组):一免后10天进行第二次免疫,其余步骤同一免组。结果表明:用二联活疫苗免疫SPF雏鸡后,NF8株与Lasota株间不产生明显的相互干扰作用,攻毒保护率与各自的单苗相比无明显差异。用二联活疫苗免疫有母源抗体的雏鸡后,如果只进行一次免疫,新城疫免疫可供完全保护,法氏囊免疫效果稍差,不能完全保护,但攻毒保护率与各自的单苗相比无明显差异;如果二次加强免疫,其抗体水平、攻毒后的保护率与各自的单苗相比无明显差异,具有完全保护效力。用二联苗免疫7日龄SPF鸡,6周、7周、8周、9周后采血测抗体并分别攻击ND强毒、IBD强毒后计算保护指数,其ND和IBD的免疫保护期分别在9周以上和7周左右。
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